細(xì)胞自噬對(duì)骨折愈合影響的體內(nèi)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 研究骨折斷端骨組織細(xì)胞自噬水平的改變
　　目的:研究骨折斷端骨組織細(xì)胞自噬水平的改變。
　　方法:成年雄性SD大鼠36只納入此項(xiàng)研究。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)兩個(gè)組，實(shí)驗(yàn)組:通過(guò)對(duì)30只SD大鼠行右股骨干中段骨折手術(shù)制作簡(jiǎn)單橫行骨折模型，并分別于術(shù)后6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、3天和1周各時(shí)間點(diǎn)處死5只大鼠摘取標(biāo)本行免疫熒光檢測(cè)骨折斷端處組織內(nèi)LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)變化;對(duì)照組:摘取右股骨中

2、段骨標(biāo)本行LC3-Ⅱ免疫熒光檢測(cè)。
　　結(jié)果:免疫熒光染色檢測(cè)結(jié)果顯示，各組的LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)均定位于細(xì)胞質(zhì)中，對(duì)照組LC3-Ⅱ蛋白呈散在表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)所測(cè)得LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P＜0.05)，且隨時(shí)間進(jìn)展實(shí)驗(yàn)組LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)也呈動(dòng)態(tài)變化。
　　結(jié)論:骨折可造成創(chuàng)傷周?chē)墓墙M織細(xì)胞內(nèi)自噬水平較正常時(shí)明顯升高。
　　第二部分 通過(guò)調(diào)控骨折大鼠體內(nèi)的自噬通路水平，以評(píng)價(jià)自噬水平改變對(duì)骨折愈合的影響<

3、br>　　目的:通過(guò)調(diào)控骨折大鼠體內(nèi)的自噬通路水平，以評(píng)價(jià)自噬水平改變對(duì)骨折愈合的影響。
　　方法:將189只成年雄性SD大鼠納入此實(shí)驗(yàn)。通過(guò)對(duì)SD大鼠行右股骨干中段骨折造模手術(shù)后將其平均分為A、B、C三組，每組63只。A組（誘導(dǎo)自噬組）:于腹腔內(nèi)每日注射自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素(1mg/kg);B組（對(duì)照組）:每日腹腔內(nèi)注射與實(shí)驗(yàn)組等量溶劑(0.4％DMSO，1.2ml/kg);C組（抑制自噬組）:每日于腹腔內(nèi)注射自噬抑制劑3-甲基腺

4、嘌呤(30mg/kg)。三組老鼠經(jīng)造模成功后第二天連續(xù)給藥至收集標(biāo)本前一日，各組分別于第2、4、6周隨機(jī)選取5只大鼠行X線、Micro-CT觀察骨痂生長(zhǎng)情況;選取6只大鼠行免疫熒光觀測(cè)LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)和行免疫組化觀測(cè)Beclin-1蛋白表達(dá)來(lái)評(píng)價(jià)大鼠體內(nèi)自噬水平;選取5只大鼠行H&E染色觀察骨折斷端骨組織成骨細(xì)胞數(shù)量評(píng)價(jià)成骨活性;選取5只大鼠行Western Blot檢測(cè)評(píng)價(jià)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)情況。
　　結(jié)果:免疫

5、熒光檢查顯示，各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)上A組LC3-Ⅱ蛋白在骨組織中表達(dá)明顯高于B、C兩組，C組LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)較其它兩組明顯降低。三組行X線檢查后發(fā)現(xiàn)A、B兩組于造模2周后即開(kāi)始有骨痂形成，而C組骨折線仍清晰可見(jiàn)，此外A組骨痂鈣化時(shí)間均早于B、C兩組。Micro-CT第6周結(jié)果顯示的平均骨小梁密度值:A組78.31±5.30、B組59.81±4.40，C組31.20±4.87，三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。A、B、C三組標(biāo)本第2周免疫