芡實(shí)殼三萜類提取物降血糖及其改善胰島素抵抗作用研究.pdf

1、芡實(shí)是一年生水生草本植物芡(EuryaleferoxSalisb.)的成熟種仁，是睡蓮科(Nymphaeaceae)芡屬植物，芡實(shí)原產(chǎn)東亞和印度，我國主產(chǎn)于河南、安徽、湖北等地，產(chǎn)量多而且資源豐富。芡實(shí)為藥食同源植物，藥用價(jià)值極高。芡實(shí)的種仁外面包有芡實(shí)硬殼，生產(chǎn)中將芡實(shí)殼去除，芡實(shí)殼資源廢棄而未得到利用。本研究主要對(duì)食品工業(yè)生產(chǎn)中廢棄的芡實(shí)外殼的成分進(jìn)行研究，并對(duì)其提取物的降血糖及其胰島素抵抗分子機(jī)制進(jìn)行了探索，為后續(xù)的芡實(shí)殼綜合開發(fā)

2、利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)支持。
　　本研究采用70%濃度的乙醇作為溶劑，將芡實(shí)殼粉碎后，在65℃下用乙醇水浴提取3次，每次16h，減壓回收乙醇后，與水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，得到活性物質(zhì)。采用紫外分光光度法對(duì)芡實(shí)殼提取物成分進(jìn)行初步測定，利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)對(duì)提取物復(fù)雜成分進(jìn)行了分離和定性。在動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)中，通過鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)得到穩(wěn)定可靠的高血糖模型，通過檢測各組小鼠灌胃前后的體重、血

3、糖、血清胰島素、血脂水平，分析臟器指數(shù)，胰島素敏感指數(shù)等指標(biāo)，評(píng)價(jià)芡實(shí)殼提取物的降血糖效果。利用RT-PCR方法檢測小鼠肝臟組織中叉頭轉(zhuǎn)錄因子(Fox01)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)、胰島素信號(hào)通路蛋白(PKB)基因表達(dá)；利用酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測其相對(duì)應(yīng)的蛋白水平，闡述芡實(shí)殼提取物對(duì)胰島素抵抗信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果表明，以5%香草醛—冰乙酸和高氯酸為顯色劑，在548nm測定樣品的吸光度，芡實(shí)殼提取物中三萜含

4、量占樣品總量的36.7%。通過LC-MS測定提取物的分子量，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，主要成分的分子量定位在326和512左右，推測分子式可能是C23H18O13和C25H20O12。富含三萜的芡實(shí)殼提取物能夠明顯改善高血糖小鼠的體重減輕的癥狀，可以抑制高血糖小鼠肝臟、腎臟和脾臟因病變發(fā)生的腫大，血清中C肽(C-P)含量和胰島素敏感指數(shù)(ISI)明顯升高(p<0.05)。與未處理的高血糖小鼠相比，芡實(shí)殼三萜類提取物能夠顯著降低血清中總膽固醇(TC)

5、、低密度脂蛋白(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平(p<0.05)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)則顯著升高(p<0.01)。芡實(shí)殼三萜類提取物可以提高組織中胰島素抵抗相關(guān)基因PI-3K、PKB的基因表達(dá)，可以顯著上調(diào)組織中PI-3K和PKB的蛋白表達(dá)(p<0.05)，同時(shí)抑制轉(zhuǎn)錄因子Fox01的基因和蛋白的表達(dá)。
　　綜上所述，70%芡實(shí)殼乙醇提取物經(jīng)過有機(jī)相萃取后含有豐富的三萜類物質(zhì)。這些活性物質(zhì)可以改善高血糖小鼠糖代謝、脂