化濁解毒法對(duì)慢性萎縮性胃炎癌前病變相關(guān)基因和血管生成機(jī)制影響的研究.pdf

1、第一部分 CyclinD1和PTEN在胃黏膜癌變多階段中的表達(dá)及相關(guān)性
　　 目的:采用免疫組化法探討癌基因細(xì)胞周期蛋白D1(Hormone of cellcycle D1,CyclinD1)和抑癌基因張力蛋白同源染色體缺失磷酸酯酶(Phosphate and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在胃黏膜癌變多階段中的表達(dá)及相關(guān)性,為進(jìn)一步研究胃癌的發(fā)生機(jī)制提供理論基礎(chǔ),

2、為胃癌的早期診斷提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù),也為中西醫(yī)的結(jié)合找到切合點(diǎn)。
　　 方法:選擇河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)院臨床病理科保存的2004年-2008年胃竇部病理活檢組織存檔蠟塊,共223例。其中胃癌組織標(biāo)本均未經(jīng)放射治療和(或)化學(xué)治療。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)CyclinD1和PTEN在不同胃黏膜病變石蠟包埋標(biāo)本的表達(dá)及相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　　 1.在慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生、不典型增生和胃癌中Cycl

3、inD1的表達(dá)率逐漸增高,PTEN的表達(dá)率逐漸降低,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.CyclinD1和PTEN在胃黏膜癌變多階段中的陽(yáng)性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1.隨著胃黏膜癌變的階段性進(jìn)展,CyclinD1蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率越來(lái)越大;PTEN蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率越來(lái)越小。
　　 2.隨著胃黏膜癌變的階段性進(jìn)展,CyclinD1蛋白和PTEN蛋白表達(dá)有關(guān)聯(lián)性,密切程度中等,隨著Cycl

4、inD1蛋白表達(dá)增加PTEN蛋白表達(dá)減小。
　　 第二部分化濁解毒和胃方對(duì)慢性萎縮性胃炎胃癌前病變的療效觀察
　　 目的:觀察以“濁毒”理論組方的化濁解毒和胃方對(duì)慢性萎縮性胃炎(CAG)癌前病變的治療作用。
　　 方法:將110例CAG癌前病變患者隨機(jī)分為兩組,治療組(55例)給予化濁解毒和胃方口服,對(duì)照組(55例)給予維甲酸口服,療程均為6個(gè)月。觀察兩組患者臨床內(nèi)鏡、病理療效及治療前后CyclinD1和PTEN

5、表達(dá)積分值的變化。
　　 結(jié)果:胃鏡下治療組對(duì)黏膜白相和膽汁反流的改善優(yōu)于對(duì)照組,病理療效變化比較顯示,治療組較對(duì)照組治愈率高,免疫組化結(jié)果顯示,化濁解毒和胃方能顯著抑制CyclinD1的表達(dá),升高PTEN的表達(dá),有顯著性差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.化濁解毒和胃方能減輕患者胃黏膜充血、水腫、糜爛,緩解黏膜白相、顆粒增生、膽汁反流等胃鏡征象。
　　 2.化濁解毒和胃方能提

6、高患者IM、ATP等不同病理分型的治愈率。
　　 3.化濁解毒和胃方能抑制各階段胃黏膜CyclinD1蛋白的表達(dá)、增強(qiáng)PTEN蛋白的表達(dá),抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡,從而恢復(fù)細(xì)胞增殖與凋亡間的平衡狀態(tài)。
　　 第三部分化濁解毒和胃方對(duì)胃癌前病變大鼠胃癌相關(guān)基因的影響
　　 目的:觀察化濁解毒和胃方對(duì)慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜細(xì)胞周期蛋白D1及張力蛋白同源染色體缺失磷酸酯酶基因Mrna表達(dá)的影響。
　　

7、 方法:Wistar大鼠66只隨機(jī)分為6組,每組11只:正常對(duì)照組(空白組)、模型組、維甲酸治療組(維甲酸組)、化濁解毒和胃方高劑量治療組(高劑量組)、化濁解毒和胃方中劑量治療組(中劑量組)、化濁解毒和胃方低劑量治療組(低劑量組)。采用幽門(mén)彈簧插入復(fù)合法復(fù)制CAG癌前病變模型,造模成功后,各組給予相應(yīng)的藥物每天灌胃1次,每次2mL,連續(xù)12周然后用基因的反轉(zhuǎn)錄(RT)和聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合(RT-PCR)檢測(cè)癌前病變大鼠胃黏

8、膜CyclinD1及PTENmRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:與空白組比較,模型組CyclinD1mRNA的表達(dá)增高,PTENmRNA表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);各治療組與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高劑量組與維甲酸組降低CyclinD1mRNA,增高PTENmRNA的表達(dá)優(yōu)于中藥中、低劑量組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.化濁解毒和胃方能使實(shí)驗(yàn)性慢性萎縮性胃炎大鼠的飲食、

9、活動(dòng)、精神狀態(tài)、毛發(fā)、攝食、大便以及體重等方面得到大體改善。
　　 2.化濁解毒和胃方能改善實(shí)驗(yàn)性慢性萎縮性胃炎大鼠的病理改變。
　　 3.化濁解毒和胃方能降低CyclinD1mRNA的表達(dá),明顯增高PTENmRNA表達(dá)。
　　 4.“以方測(cè)證”驗(yàn)證慢性萎縮性胃炎癌前病變中CyclinD1mRNA、PTENmRNA可能是“濁毒”在基因方面的物質(zhì)表達(dá)。
　　 第四部分化濁解毒和胃方對(duì)胃癌前病變大鼠血管生成機(jī)

10、制的影響
　　 目的:本研究以方測(cè)證,觀察化濁解毒和胃方對(duì)慢性萎縮性胃炎胃癌前病變大鼠胃黏膜組織缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia induciblefactor-1α,HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)的影響,探討化濁解毒對(duì)慢性萎縮性胃炎癌前病變血管新生方面的可能治療機(jī)制。
　　 方法:Wistar大鼠66只隨機(jī)分為6組,每組11只:正常對(duì)照組

11、(空白組)、模型組、維甲酸治療組(維甲酸組)、化濁解毒和胃方高劑量治療組(高劑量組)、化濁解毒和胃方中劑量治療組(中劑量組)、化濁解毒和胃方低劑量治療組(低劑量組)。采用幽門(mén)彈簧插入復(fù)合法復(fù)制CAG癌前病變模型,各組給予相應(yīng)的藥物每天灌胃1次,每次2mL,連續(xù)12周。然后采用免疫組織化學(xué)和western-blot的方法,觀察化濁解毒和胃方對(duì)慢性萎縮性胃炎胃癌前病變大鼠胃黏膜組織VEGF、HIF-1α的影響
　　 結(jié)果:與空白組比

12、較,模型組及各治療組VEGF、HIF-1α的表達(dá)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);各治療組與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高劑量組與中劑量組降低VEGF、HIF-1α的表達(dá)優(yōu)于維甲酸組、低劑量組(P＜0.05),低劑量組與維甲酸組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.化濁解毒和胃方能降低胃癌前病變大鼠胃黏膜HIF-1α、VEGF的表達(dá)。
　　 2.“以方測(cè)證”驗(yàn)證慢