清心開竅方三種提取部位對AD大鼠學習記憶障礙的影響.pdf

1、目的：
　　探討清心開竅方三種提取部位對AD大鼠學習記憶障礙的影響。
　　方法:
　　選用清潔級青年雄性SD大鼠(250±20g)112只，隨機分為7組:正常組，假手術(shù)組，模型組，安理申組，皂苷組，揮發(fā)油組，多糖組，每組16只。除正常組外，模型組及各治療組均采用雙側(cè)海馬注射聚集態(tài)的A阻-40建立AD模型大鼠，假手術(shù)組雙側(cè)海馬注射等體積的生理鹽水。所有大鼠于造模后第二天開始灌胃，安理申組，皂苷組，揮發(fā)油組，多糖組分別服用

2、安理申溶液(1.67mg/kg/d)，皂苷提取物(9ml/kg/d)、揮發(fā)油提取物(3.33ml/kg/d)、及多糖提取物(8.33ml/kg/d)，正常組，假手術(shù)組，模型組分別灌服等體積的生理鹽水，連續(xù)14天。采用Morris水迷宮測試大鼠的空間學習記憶能力，包括定位航行實驗（逃避潛伏期）和空間搜索實驗（穿臺次數(shù)）。治療2周結(jié)束后，各組AD大鼠經(jīng)心臟依次灌注生理鹽水及4％多聚甲醛固定后，用免疫組化法觀察Aβ，IL-1β及GFAP在大鼠

3、海馬CA1區(qū)組織神經(jīng)元中的表達，六胺銀染色法檢測海馬CA1區(qū)內(nèi)Aβ的沉積;直接取雙側(cè)海馬凍存，采用Western Blot檢測海馬區(qū)Aβ，IL-1β及GFAP的表達，實時定量PCR檢測海馬區(qū)Aβ mRNA，IL-1β mRNA及GFAP mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.Morris水迷宮結(jié)果
　　造模前各組大鼠同一時間點的逃避潛伏期、穿臺次數(shù)均無統(tǒng)計學意義，且逃避潛伏期隨時間推移逐漸縮短。造模后，與模型組比較，除

4、揮發(fā)油組、多糖組外，各治療組的逃避潛伏期均縮短，穿臺次數(shù)顯著增多（P＜0.05，P＜0.01;與安理申組比較，清心開竅方三種提取部位組大鼠逃避潛伏期均延長，穿臺次數(shù)減少(P＜0.05，P＜0.01);清心開竅方三種提取部位組之間比較:皂苷組的逃避潛伏期比揮發(fā)油組、多糖組縮短，穿臺次數(shù)較兩組增加(P＜0.05，P＜0.01)，且多糖組的潛伏期最長;而揮發(fā)油組與多糖組的穿臺次數(shù)比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.六胺銀染色的結(jié)果

5、
　　在模型組大鼠海馬CA1區(qū)可見大量的六胺銀染色后的黑色老年斑塊的沉積，與對照組（正常組、假手術(shù)組）比較差異顯著(P＜0.01);與模型組比較，安理申組，皂苷組大鼠海馬CA1區(qū)黑色老年斑塊陽性數(shù)量減少（P＜0.05，P＜0.01），而揮發(fā)油組，多糖組大鼠海馬CA1區(qū)黑色老年斑塊陽性數(shù)量與模型組大鼠無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;與安理申組比較，清心開竅方三種提取部位組大鼠海馬CA1區(qū)老年斑塊數(shù)量顯著增多(P＜0.05，P＜0.01

6、);而清心開竅方三種提取部位組之間比較:揮發(fā)油組，多糖組大鼠海馬CA1區(qū)老年斑數(shù)量較皂苷組增多(P＜0.05);而揮發(fā)油組與多糖組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）.
　　3.免疫組化的檢測結(jié)果
　　與模型組比較，各治療組海馬區(qū)Aβ，IL-1β與GFAP的表達均有不同程度的減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，P＜0.01);與安理申組比較，清心開竅方三種有效提取部位組海馬區(qū)Aβ，IL-1β與GFAP的表達有不同程度的增加(P

7、＜0.05，P＜0.01);清心開竅方三種有效提取部位組相互比較結(jié)果顯示:Aβ的表達在三組之間沒有差異(P＞0.05)，皂苷組IL-1β與GFAP的表達較清心開竅方揮發(fā)油組，多糖組減少（P＜0.05，P＜0.01），揮發(fā)油組IL-1β與GFAP的表達比清心開竅方多糖組較少（P＜0.05，P＜0.01）。
　　4.海馬區(qū)Aβ mRNA與蛋白水平表達的結(jié)果
　　與模型組比較，各治療組海馬區(qū)Aβ mRNA與蛋白水平表達均顯著較少(

8、P＜0.05，P＜0.01;與安理申組比較，清心開竅方三種有效提取部位組Aβ mRNA與蛋白水平表達均顯著增加(P＜0.01);皂苷組Aβ mRNA與蛋白水平表達較揮發(fā)油組、多糖組顯著減少(P＜0.01)，而揮發(fā)油組Aβ mRNA與蛋白水平表達較多糖組減少(P＜0.05，P＜0.01)。
　　5.海馬區(qū)IL-1βmRNA與蛋白水平表達的結(jié)果
　　與模型組比較，各治療組海馬區(qū)IL-1β mRNA與蛋白水平表達均顯著較少(P＜0

9、.05，P＜0.01);與安理申組比較，清心開竅方三種有效提取部位組IL-1βmRNA與蛋白水平表達均顯著較少(P＜0.01);清心開竅方三種有效提取部位組比較:皂苷組IL-1β mRNA與蛋白水平表達較揮發(fā)油組、多糖組明顯減少（P＜0.05，P＜0.01），揮發(fā)油組IL-1βmRNA與蛋白水平表達較多糖組顯著降低(P＜0.01)。
　　6.海馬區(qū)GFAPmRNA與蛋白水平表達的結(jié)果
　　與模型組比較，各治療組海馬區(qū)GFAP

10、 mRNA與蛋白水平表達均顯著較少(P＜0.05，P＜0.01);與安理申組比較，清心開竅方三種有效提取部位組GFAPmRNA與蛋白水平表達均顯著增多(P＜0.05，P＜0.01);清心開竅方三種有效提取部位組比較:皂苷組GFAP mRNA與蛋白水平表達較清心開竅方揮發(fā)油組、清心開竅方多糖組顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)，而揮發(fā)油組GFAP mRNA與蛋白水平表達較清心開竅方多糖組明顯減少(P＜0.05，P＜0.01)。