清心開竅方有效成分對AD大鼠腦內(nèi)凋亡相關(guān)基因的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討清心開竅方三種有效成分對AD大鼠大腦海馬及皮層區(qū)凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP表達的影響。
  方法:選用成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠112只,隨機分為7組:正常組、假手術(shù)組、模型組、安理申組、皂苷組、揮發(fā)油組、多糖組,每組16只。采用海馬注射Aβ1-40誘導(dǎo)AD大鼠模型,造模后第2天開始灌胃,安理申組服用安理申溶液(鹽酸多奈哌齊片,1.67mg/kg/d)、皂苷組服用

2、皂苷提取物(9ml/kg/d)、揮發(fā)油組服用揮發(fā)油提取物(3.33ml/kg/d)、多糖組服用多糖提取物(8.33ml/kg/d),正常組,假手術(shù)組,模型組給予等量雙蒸水灌胃,各組每天干預(yù)一次,連續(xù)2周(上午10:00)。灌胃結(jié)束后,對各組AD大鼠進行心臟灌注生理鹽水及4%多聚甲醛固定后,采用TUNEL染色法檢測海馬CA1區(qū)及皮層區(qū)細胞凋亡;采用免疫組化法觀察Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP在大鼠海馬CA1區(qū)及皮層區(qū)組

3、織神經(jīng)元中的表達;直接取雙側(cè)大腦海馬及皮層區(qū)凍存,采用實時定量熒光PCR檢測海馬、皮層區(qū)Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA及β-APP mRNA表達情況;采用Western Blot(WB)法檢測AD大鼠海馬、皮層區(qū)Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP的表達。
  結(jié)果:
  1.TUNEL檢測結(jié)果:
  正常組與假手術(shù)組之間海馬、皮層區(qū)凋亡細胞數(shù)/高倍鏡視野差別無統(tǒng)計學

4、意義(P>0.05);與假手術(shù)組相比,模型組海馬及皮層區(qū)細胞凋亡數(shù)/高倍鏡視野顯著增多(P<0.01);與模型組比較,各治療組海馬及皮層區(qū)細胞凋亡數(shù)均顯著減少(P<0.01);與安理申組比較,揮發(fā)油組和多糖組海馬及皮層區(qū)細胞凋亡數(shù)均顯著增多(P<0.05,P<0.01);安理申組和皂苷組比較凋亡細胞數(shù)/高倍鏡視野差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。皂苷組較揮發(fā)油、多糖組減少顯著(P<0.01),
  2.免疫組化檢測結(jié)果:
 

5、 與模型組比較,多糖組海馬區(qū)Bax、Bcl-2、β-APP及皮層區(qū)Bax、Bcl-2、Caspase-3和β-APP表達差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05),揮發(fā)油組海馬及皮層區(qū)β-APP表達差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05);其余治療組皮層及海馬區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達明顯減少,Bcl-2表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01);與安理申組比較,清心開竅方三種有效成分組,海馬及皮層區(qū)Bax、Caspa

6、se-3和β-APP表達明顯增加,Bcl-2表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01)。與皂苷組比較,揮發(fā)油組、多糖組Bax、Caspase-3和β-APP表達明顯增多,Bcl-2表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01)。
  3.PCR檢測結(jié)果:
  與模型組比較,多糖組海馬區(qū)Bax、Bcl-2和Caspase-3及皮層區(qū)Bax、Bcl-2和β-APP表達差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05

7、);多糖組皮層區(qū)Caspase-3和海馬區(qū)β-APP表達明顯減少,差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05);剩余治療組皮層及海馬區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達明顯減少,Bcl-2表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01);與安理申組比較,清心開竅方三種有效成分組,海馬及皮層區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達明顯增加,Bcl-2表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01)。與皂苷組比較,揮

8、發(fā)油組、多糖組Bax、Caspase-3和β-APP表達明顯增多,Bcl-2表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05, P<0.01)。
  4.WB檢測結(jié)果:
  與模型組比較,多糖組海馬區(qū)Caspase-3和β-APP及皮層區(qū)Bax、Bcl-2、Caspase-3和β-APP表達差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05);多糖組海馬區(qū)Bax表達明顯減少,海馬區(qū)Bcl-2表達明顯增多,差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.01);剩余治療

9、組皮層及海馬區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達明顯減少,Bcl-2表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01);與安理申組比較,皂苷組海馬及皮層區(qū)Bcl-2、Caspase-3和β-APP表達無統(tǒng)計學意義(P>0.05);皂苷組海馬及皮層區(qū)Bax表達明顯增多,差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01);揮發(fā)油組和多糖組海馬及皮層區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達明顯增加,Bcl-2表達明顯減少,差

10、異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01)。與皂苷組比較,揮發(fā)油組、多糖組Bax、Caspase-3和β-APP表達明顯增多,Bcl-2表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.01)。
  5.各實驗中Bcl-2/Bax表達比值結(jié)果:
  與正常組比較,模型組Bcl-2/BAX比值下調(diào);與模型組比較,各治療組Bcl-2/BAX比值上調(diào)。
  結(jié)論:
  1.清心開竅方三種有效成分可以不同程度抑制A

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