表沒食子兒茶素沒食子酸酯對(duì)大腸桿菌引起的膀胱上皮感染預(yù)防和治療作用的研究.pdf

1、第一部分：EGCG干預(yù)濃度的選擇及安全性評(píng)估
　　目的：觀察不同濃度表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)無菌溶液對(duì)正常小鼠膀胱上皮細(xì)胞的影響,探討合適的實(shí)驗(yàn)藥物濃度。
　　方法：昆明雌性小鼠36只,隨機(jī)分成6組,PBS對(duì)照組和0.5、1,、2、4、8mmol/LEGCG實(shí)驗(yàn)組,每組各6只小鼠;分別灌注PBS緩沖液,和相應(yīng)濃度的EGCG無菌溶液。24h后,獲取標(biāo)本,并進(jìn)行病理H

2、E染色觀察大體形態(tài)和熒光染色觀察Uroplakins膜蛋白的完整性,并檢測(cè)其炎癥因子白介素-6和粒細(xì)胞集落刺激因子的表達(dá)。
　　結(jié)果：經(jīng)病理HE及熒光染色顯示,除8mmolEGCG組外,PBS組和其余EGCG組膀胱尿路上皮均未見明顯破壞,8mmol/LEGCG實(shí)驗(yàn)組可引起尿道上皮部分脫落,各組均無炎癥因子的異常表達(dá)增高,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：小于或等于4mol/LEGCG溶液對(duì)膀胱尿路上皮細(xì)胞的功能和

3、形態(tài)學(xué)均無明顯影響,可視為適宜的干預(yù)。
　　第二部分：關(guān)于EGCG對(duì)小鼠膀胱上皮大腸細(xì)菌感染的預(yù)防性作用研究
　　目的：證實(shí)表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)在細(xì)菌侵入時(shí)對(duì)膀胱上皮的預(yù)防性保護(hù)作用,并評(píng)估其對(duì)大腸桿菌的抵抗效果。
　　方法：將健康雌性小鼠隨機(jī)分成0.5、1、2、4mmol/LEGCG共4個(gè)組,和PBS組,每個(gè)分組包括6只小鼠。將PBS緩沖液和不同濃度的

4、EGCG溶液50μl灌注入相應(yīng)組別的小鼠膀胱內(nèi)。24h后,建立小鼠急性細(xì)菌性膀胱感染模型,48h后獲取標(biāo)本,進(jìn)行HE染色和免疫熒光染色觀察各組膀胱上皮大體形態(tài)和Uroplakins膜蛋白的完整性,并定量測(cè)定炎癥相關(guān)因子白介素-6和粒細(xì)胞集落因子的表達(dá)水平,根據(jù)各組形態(tài)學(xué)特征和炎癥因子表達(dá)水平,觀察各組效果,根據(jù)預(yù)防組結(jié)果遴選治療組濃度。
　　結(jié)果：1、2、4mmol/LEGCG組炎癥因子表達(dá)與PBS組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0

5、5),此三組炎癥因子表達(dá)依次降低,4mmol/L預(yù)防組預(yù)防效果最佳,,形態(tài)學(xué)也符合此規(guī)律。0.5mmol/L預(yù)防組與PBS組相比在炎癥因子表達(dá)方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),膀胱尿路上皮破壞明顯。根據(jù)預(yù)防組效果遴選1、2、4mmol/L三組作為治療組。
　　結(jié)論：EGCG可以有效抵抗大腸桿菌侵入,表現(xiàn)出良好的抗菌作用,對(duì)尿道上皮具有保護(hù)作用。
　　第三部分：EGCG對(duì)小鼠膀胱上皮大腸細(xì)菌感染的治療性保護(hù)作用的研究
　

6、　目的：證實(shí)表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)在細(xì)菌侵入后對(duì)膀胱上皮的治療性保護(hù)作用,并評(píng)估其對(duì)膀胱上皮修復(fù)的影響。
　　方法：將30只健康雌性小鼠隨機(jī)分成PBS組、1、2、4mmol/LEGCG共5個(gè)組,每個(gè)分組包括6只小鼠,將大腸桿菌懸濁液經(jīng)尿道灌注入膀胱內(nèi)建立膀胱感染模型,48h后向小鼠膀胱內(nèi)再次灌注與組別相應(yīng)濃度的EGCG無菌溶液和PBS緩沖液,7d后處死小鼠,獲取膀胱標(biāo)