CpG質粒DNA納米顆粒的制備及雞免疫刺激活性研究.pdf

1、CpG寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotice，CpG ODN)是近年來發(fā)現(xiàn)的新型免疫佐劑，對免疫細胞具有廣泛的激活作用。本研究首先以陽離子多聚體聚乙烯亞胺(PEI)、殼聚糖為包被材料，研制含質粒DNA納米顆粒，利用凝膠阻滯試驗、電鏡觀察和體外質粒釋放試驗等試驗證明，制備的納米顆粒包裹效率、均一度、穩(wěn)定性較高。進而以含不同拷貝數(shù)CpG基序的三種重組質粒進行雞淋巴細胞轉化試驗，根據(jù)MTT比色法測定結果，篩選得免疫刺激效果

2、最佳的質粒。然后分別以PEI和殼聚糖為包裹材料，制備質粒DNA納米顆粒，進行淋巴細胞體外轉化試驗，結果表明，以生理鹽水為溶媒和N/P比為6制備的PEI/CpG重組質粒納米顆粒具有最佳的免疫刺激活性。最后用重組菌發(fā)酵培養(yǎng)大規(guī)模制備重組質粒pcDNA-CpG60，用純化質粒分別制備PEI和殼聚糖納米顆粒，以100μg/只和200μg/只質粒劑量與新城疫弱毒活疫苗聯(lián)合免疫試驗雞，分別于接種后7、14、21、28、35天采集血清，測定血凝抑制抗