CpG DNA對異育銀鯽免疫細(xì)胞活性誘導(dǎo)作用的研究.pdf

1、近年來的研究發(fā)現(xiàn),細(xì)菌基因組DNA和人工合成的含有未甲基化CpG基序的特定寡核苷酸序列(統(tǒng)稱為CpG DNA)能夠直接或間接刺激人和小鼠等多種高等動物的B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞以及天然殺傷細(xì)胞的活化或增殖,是一種具有廣泛作用的免疫激活劑。但是關(guān)于CpG DNA對魚類免疫功能調(diào)節(jié)作用的研究才剛剛起步。
　　 本實(shí)驗(yàn)首次探討了6種人工合成的CpG DNA對異育銀鯽體外培養(yǎng)的頭腎巨噬細(xì)胞、外周血白細(xì)胞的

2、活化作用。6種序列分別為:①1826(GACGTT)；②2006(GTCGTT)；③1670(AACGTT)；④1670-N(AACGTT,更靠近5’端)；⑤1670-D(含2個AACGTT)；⑥1670-R(含有反向“CG”序列,即AAGCTT)。在細(xì)胞水平上,分別用NBT法檢測氧呼吸爆發(fā)活性；通過測定NO的含量檢測氮呼吸爆發(fā)活性；采用MTT法測定外周血白細(xì)胞的增殖。在分子水平上,以異育銀鯽體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞為研究對象,探討了人工合成

3、的6種CpG DNA對2種重要的細(xì)胞因子IL-1β、IL-12基因表達(dá)水平的影響。體外作用24h后分離總RNA,經(jīng)過RT-PCR擴(kuò)增獲得IL-1β和IL-12 cDNA。采用普通RT-PCR對這2種細(xì)胞因子的表達(dá)進(jìn)行定性分析；進(jìn)而采用熒光定量RT-PCR對這2種細(xì)胞因子的表達(dá)進(jìn)行定量分析。結(jié)果如下:
　　 1.除1670-R外,其余5種CpG DNA都能引起巨噬細(xì)胞和外周血白細(xì)胞的活化,主要表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)的氮氧呼吸爆發(fā)活性的增加和

4、細(xì)胞增殖活性的提高；通過定性分析,IL-1β、IL-12擴(kuò)增片段明亮清晰,而對照組細(xì)胞中幾乎擴(kuò)增不出相應(yīng)的cDNA；通過定量分析,IL-1β、IL-12的表達(dá)量與對照組的相比具有顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)差異。反向序列1670-R與對照組相比,沒有明顯的增強(qiáng)效果。
　　 2.1670-D的免疫增強(qiáng)效果最為顯著(P<0.01)。
　　 3.CpG DNA的免疫增強(qiáng)效果還體現(xiàn)出一定的效應(yīng),當(dāng)濃度為10μg·