G9a抑制劑BIX-01294對急性T淋巴細(xì)胞白血病Molt-4細(xì)胞株作用的研究.pdf

1、【目的】研究G9a抑制劑BIX-01294在體外對急性T淋巴細(xì)胞白血病Molt-4細(xì)胞增殖、凋亡的影響,并初步探討其可能的機(jī)制。
　　【方法】用MTT比色法檢測BIX-01294作用后急性T淋巴細(xì)胞白血病Molt-4細(xì)胞增殖率的變化;用流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡;Western Blot觀察在BIX-01294作用下Molt-4細(xì)胞的凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax,細(xì)胞周期調(diào)控因子P27、P21表達(dá)的變化;West

2、ern Blot檢測Molt-4細(xì)胞的組蛋白H3乙?；?、H3K9、H3K27甲基化水平、以及P15基因、甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT1表達(dá)的變化。
　　【結(jié)果】(1)BIX-01294可抑制Molt-4細(xì)胞的增殖。經(jīng)濃度1、2、4、8μmol/L的BIX-01294作用24h后,Molt-4細(xì)胞的增殖率分別為(86.06±4.35)％、(65.43±4.21)%、(46.23±3.17)%、(12.56±1.34)%,隨藥物濃度的增加增殖率

3、下降,表現(xiàn)濃度依賴性,p<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)1μmol/LBIX-01294作用24、48、72h后,Molt-4細(xì)胞的增殖率分別為(86.06±4.35)%、(79.25±3.56)%、(70.06±3.47)%,即隨藥物作用時(shí)間的延長增殖率也逐漸下降,表現(xiàn)時(shí)間依賴性,p<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BIX-01294上調(diào)周期依賴性蛋白P27、P21的表達(dá),表現(xiàn)為濃度依賴性。
　　(2)BIX-01294誘導(dǎo)Molt-4細(xì)胞

4、的凋亡。經(jīng)濃度分別為0、1、2、4μmol/L的BIX-01294作用Molt-4細(xì)胞24h后,Molt-4細(xì)胞的凋亡率分別為(5.54±1.35)%、(15.24±2.26)%、(32.28±3.26)%、(47.52±4.37)%,隨藥物濃度的增加,凋亡率逐漸上升,表現(xiàn)為濃度依賴性,p<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BIX-01294下調(diào)凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達(dá),上調(diào)Bax,proCaspase-3表達(dá)。
　　(3)BIX-01

5、294下調(diào)組蛋白H3K9、H3K27單甲基化和二甲基化水平,下調(diào)DNMT1表達(dá),使P15重新表達(dá),而組蛋白H3乙酰化水平及H3K9三甲基化水平無明顯改變。
　　【結(jié)論】(1)BIX-01294(甲基化轉(zhuǎn)移酶G9a抑制劑)下調(diào)異染色體形成相關(guān)的H3K9、H3K27單甲基化、二甲基化水平。
　　(2)BIX-01294抑制DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT1的活性,使沉默的抑癌基因P15重新表達(dá)。
　　(3)BIX-01294裂解細(xì)