氨甲喋呤對映體對急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株的體外誘導(dǎo)蛋白表達(dá)差異的研究.pdf

1、目的：
　　建立耐甲氨蝶呤（MTX）對映體的人白血病細(xì)胞株CCRF-CEM和BALL-1細(xì)胞株，分析在加藥前后蛋白表達(dá)的差異性。
　　方法：
　　采用低劑量誘導(dǎo)結(jié)合濃度遞增的方法來建立MTX對映體誘導(dǎo)的兩株親本細(xì)胞的耐藥細(xì)胞株，并且用倒置顯微鏡來觀察在MTX對映體作用前后CCFR-CEM和BALL-1細(xì)胞株形態(tài)學(xué)變化和活性的差異。采用雙向凝膠電泳技術(shù)來對MTX對映體作用后耐藥細(xì)胞株與親本細(xì)胞株的總蛋白進(jìn)行分離，用凝膠掃

2、描儀來進(jìn)行對比找出差異蛋白點(diǎn)，結(jié)合質(zhì)譜分析儀和數(shù)據(jù)庫信息檢索來鑒定差異蛋白點(diǎn)。
　　結(jié)果：
　　在蛋白定量上：CCRF-CEM，D-(-)MTX-CCRF-CEM，L-(+)-MTX-CCRF-CEM，BALL-1，D-(-)MTX-BALL-1，L-(+)-MTX-BALL-1的結(jié)果分別是36.17mg/ml,38.54mg/ml,41.09mg/ml,37.28mg/ml；作為親本細(xì)胞的對照組CCRF-CEM和BALL-

3、1檢測到的平均蛋白點(diǎn)數(shù)分別為295?14和421?12個(gè)，平均蛋白點(diǎn)的匹配百分率為82.57％和85.13%。而加入藥物的的實(shí)驗(yàn)組D-(-)MTX-CCRF-CEM，L-(+)-MTX-CCRF-CEM，D-(-)MTX-BALL-1，L-(+)-MTX-BALL-1檢測到的平均蛋白點(diǎn)數(shù)分別為31610，3029,44511，4327個(gè)，平均蛋白點(diǎn)的匹配百分率為85.27%，84.72%，86.89%，89.35%。設(shè)定蛋白點(diǎn)體積差異倍

4、數(shù)>2倍以上為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與CCRF-CEM比較，D-(-)MTX-CCRF-CEM有15個(gè)差異明顯的蛋白點(diǎn)，而L-(+)-MTX-CCRF-CEM中6個(gè)差異明顯的蛋白點(diǎn)，有4個(gè)在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)，而另外兩個(gè)是實(shí)驗(yàn)組不表達(dá)而對照組表達(dá)。與BALL-1相比較，D-(-)-MTX-BALL-1有17個(gè)差異明顯的蛋白點(diǎn)在實(shí)驗(yàn)組中高表達(dá)，而L-(+)-MTX-CCRF-CEM則有12個(gè)差異明顯的蛋白點(diǎn)，其中有10是實(shí)驗(yàn)組高表達(dá)，另外兩個(gè)蛋白點(diǎn)