氨甲喋呤對(duì)映體對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病體外抑制及誘導(dǎo)凋亡的差異研究.pdf

1、目的:目前在臨床治療急性淋巴細(xì)胞白血病(急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞、急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)化療方案中使用的MTX制劑中存在著單體以及L和D型兩種構(gòu)型不同比例混合現(xiàn)象,D-(-)MTX一直被當(dāng)成無意義的污染物而被忽視,沒有考慮到該藥的手性選擇性差異的問題。本實(shí)驗(yàn)就是比較體外導(dǎo)向不同濃度梯度的氨甲喋呤對(duì)映體單體(L-(+)MTX、D-(-)MTX)及其及其不同比例對(duì)映體混合體[(±)MTX]對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(BALL-1、CCRF

2、-CEM)的抑制及誘導(dǎo)凋亡的差異。
　　方法:體外導(dǎo)向藥物L(fēng)-MTX、D-MTX及其混合型(D:L=1:9-9:1)作用于淋系白血病細(xì)胞,用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)算藥物作用后的死細(xì)胞率并在倒置顯微鏡下觀察藥物作用下的細(xì)胞形態(tài)變化;EB-AO雙重?zé)晒馊旧跓晒怙@微鏡下藥物作用下的觀察細(xì)胞染色情況;應(yīng)用MTT比色法分析其對(duì)細(xì)胞的抑制率繪制抑制曲線圖并計(jì)算IC50值,比較不同MTX對(duì)映體(L-MTX/D-MTX)及其混合型對(duì)增殖淋系白血病細(xì)胞的增

3、殖的抑制作用;碘化丙啶(PI)單染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)藥物作用后的細(xì)胞周期以及凋亡峰變化情況,比較不同MTX對(duì)映體(L-MTX/D-MTX)及其混合型對(duì)增殖淋系白血病細(xì)胞的DNA合成的抑制作用;DNA Ladder測(cè)藥物作用后的細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:①L-(+)MTX、D-(-)MTX及混合型能以時(shí)間和劑量依賴方式抑制BALL-1細(xì)胞和CCRF-CEM細(xì)胞的增殖,且得出L-(+)MTX和D-(-)MTX對(duì)BALL-1、CCRF-CE

4、M細(xì)胞的增殖抑制作用具有化學(xué)結(jié)構(gòu)的立體選擇性,抑制強(qiáng)度依次為 L-(+)MTX>D-(-)MTX,但卻低于(±)MTX(D:L=1:9、D:L=2:8),但(±)MTX在D:L=3:7-1:9范圍內(nèi)抑制強(qiáng)度低于L-(+)MTX,高于D-(-)MTX;同時(shí)可以發(fā)現(xiàn)同種藥物作用下對(duì)BALL-1的殺傷力高于CCRF-CEM;同時(shí)得出L-(+)MTX-CCRF-CEM/BALL-1、D-(-)MTX-CCRF-CEM/BALL-1的24h-IC

5、50值(umol/L)分別為143.36±1.96,80.02±2.24,169.67±2.72,103.78±2.10,48h-IC50值(umol/L)分別為20.76±1.16,58.17±1.98,34.13±1.24,96.78±2.05,72h- IC50值(umol/L)分別為2.21±0.31,11.28±1.40,4.05±0.74,19.57±1.62,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②L-(+)MTX、D-(-

6、)MTX及混合型(1μmol.L-1)能誘導(dǎo)BALL-1細(xì)胞和CCRF-CEM細(xì)胞發(fā)生壞死、凋亡,倒置顯微鏡和熒光顯微鏡觀察不同濃度組,不同時(shí)間作用下,出現(xiàn)細(xì)胞體積變小、核固縮、核染色質(zhì)濃集等不同程度的形態(tài)學(xué)改變,并且通過DNA Ladder測(cè)細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)D-(-)MTX凋亡梯度弱于L-(+)MTX及混合型(D:L=1:9,1μmol.L-1)且BALL-1藥物作用后的凋亡梯度強(qiáng)于 CCRF-CEM;(3)體外導(dǎo)向藥物L(fēng)-(+)MTX、

7、D-(-)MTX及其混合型對(duì)BALL-1細(xì)胞和CCRF-CEM細(xì)胞對(duì)細(xì)胞周期產(chǎn)生抑制作用。表明氨甲喋呤單一體及其不同比例對(duì)映體對(duì)BALL-1和CCRF-CEM細(xì)胞的增殖和DNA合成有抑制作用,兩種細(xì)胞的細(xì)胞周期均發(fā)生G0/G1期所占比例下降,S期所占比例上升,G2/M期的比率明顯下降。
　　結(jié)論:1.L-(+)MTX的抗BALL-1和CCRF-CEM細(xì)胞增殖作用明顯強(qiáng)于D-(-)MTX,弱于MTX對(duì)映體混合體(1:9-2:8),后