衣霉素與TRAIL協(xié)同誘導(dǎo)11q23異常急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株凋亡的體外研究.pdf

1、背景：涉及11q23的染色體異常是造血系統(tǒng)腫瘤中常見的改變，可見于40％~70%的嬰幼兒急性白血病(infant acute leukemia,IAL)。分子水平研究揭示，此異常導(dǎo)致位于11q23的混合譜系白血病(mixed lineage leukemia，MLL)基因發(fā)生重排，MLL基因重排包括易位、缺失和重復(fù)。涉及MLL基因重排的白血病大多惡性程度高，對(duì)化療不敏感，緩解率低，預(yù)后惡劣，同種造血干細(xì)胞移植無助于改善預(yù)后。TRAIL（

2、腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體）屬于腫瘤壞死因子超家族，在與死亡受體結(jié)合后,可啟動(dòng)凋亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。TRAIL被認(rèn)為可選擇性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，而對(duì)正常細(xì)胞幾乎無細(xì)胞毒性。但11q23異常白血病對(duì)TRAIL耐藥。近年來，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑如衣霉素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的研究成為一大熱點(diǎn)，同時(shí)人們?cè)赥RAIL與離子射線、抗真菌藥、化療藥、基因毒性藥和細(xì)胞因子的聯(lián)合治療方面做了大量研究，并取得了較滿意結(jié)果，但衣霉素與TRAIL協(xié)同是否能增強(qiáng)11q23

3、異常白血病的敏感性，尚缺乏理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：評(píng)估衣霉素單獨(dú)及聯(lián)合TRAIL對(duì)11q23異常白血病細(xì)胞株凋亡的影響，并探討其聯(lián)合作用后的細(xì)胞凋亡通路，期望對(duì)兩藥的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：以t(11;19)急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株KOCL44加培養(yǎng)液為空白對(duì)照組，不同濃度的衣霉素或TRAIL單獨(dú)作用于KOCL44細(xì)胞株為陰性對(duì)照組，不同濃度的衣霉素與TRAIL聯(lián)合作用于KOCL44細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)組，通過臺(tái)盼藍(lán)活

4、性測(cè)定觀察細(xì)胞存活率；用FITC標(biāo)記的Annexin-V/PI染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)早期凋亡；流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物細(xì)胞表面死亡受體的表達(dá)；Western blotting法檢測(cè)Bip、CHOP、caspase-3的蛋白表達(dá)水平，探討凋亡通路。
　　結(jié)果：衣霉素或TRAIL單獨(dú)處理KOCL44細(xì)胞株后，細(xì)胞生長(zhǎng)未見抑制，與對(duì)照組相比P>0.05；不同濃度的衣霉素與TRAIL聯(lián)合處理，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)均有抑制作用，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<

5、0.05），以2ng/mlTM+50ng/mlTRAIL抑制最為明顯，隨著劑量增大，各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），兩藥聯(lián)合有協(xié)同作用；Annexin-V/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果與此一致。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面DR4、DR5受體的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)衣霉素或TRAIL單獨(dú)處理細(xì)胞株后，細(xì)胞表面DR4、DR5受體均未見明顯表達(dá)；衣霉素及TRAIL聯(lián)合作用后細(xì)胞表面DR4未見明顯表達(dá)，而DR5受體表達(dá)明顯增強(qiáng)；通過western blott

6、ing檢測(cè)caspase-3、Bip、CHOP的表達(dá)，兩藥聯(lián)合作用可見Bip、CHOP活化，并隨作用時(shí)間延長(zhǎng)二者明顯活化；未檢測(cè)出caspase-3表達(dá)。
　　結(jié)論：1.衣霉素或TRAIL單獨(dú)作用時(shí)，KOCL44細(xì)胞株對(duì)其誘導(dǎo)的凋亡不敏感；衣霉素及TRAIL聯(lián)合作用時(shí)，細(xì)胞凋亡明顯。
　　2.兩藥聯(lián)合通過CHOP凋亡通路及Bip介導(dǎo)的UPR，上調(diào)細(xì)胞表面TRAIL死亡受體DR5的表達(dá)，從而增強(qiáng)KOCL44細(xì)胞株對(duì)TRAIL誘