CXCL13與重癥肌無力的相關(guān)性研究及實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力小鼠模型的建立.pdf

1、重癥肌無力主要是由乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)的，補(bǔ)體參與，細(xì)胞免疫依賴性，針對(duì)神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜上乙酰膽堿受體的自身免疫性疾病。目前，重癥肌無力的確切發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，但普遍認(rèn)為該病的發(fā)生與乙酰膽堿受體抗體的產(chǎn)生密切相關(guān)。B淋巴細(xì)胞是唯一能夠分泌抗體的細(xì)胞，在體液免疫中發(fā)揮著重要作用，尤其是在血清抗體陽性的重癥肌無力的發(fā)病過程中扮演了重要角色。趨化因子是能使細(xì)胞發(fā)生趨化作用的細(xì)胞因子的總稱，為一類結(jié)構(gòu)功能相似，分子量在8～10kD的小

2、分子蛋白質(zhì)，其主要作用是趨化細(xì)胞遷移。根據(jù)多肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)的不同將趨化因子分為CXC亞家族和CC亞家族。其中CXC亞家族分子靠近N-端兩個(gè)半胱氨酸之間有一個(gè)任意氨基酸，主要作用于中性粒細(xì)胞，并對(duì)淋巴細(xì)胞有趨化作用。趨化因子受體是一類介導(dǎo)趨化因子行使功能的GTP蛋白耦聯(lián)的跨膜受體，通常表達(dá)于免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞膜上。趨化因子能與其受體相互作用，通常一種趨化因子受體能與多種趨化因子相結(jié)合，而一個(gè)趨化因子可能有多個(gè)高親和性受體，他們共同構(gòu)成

3、復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。CXCL13是CXC趨化因子家族成員之一，已經(jīng)被證實(shí)在B淋巴細(xì)胞尋靶和淋巴組織中B細(xì)胞區(qū)的形成中有著重要作用，但目前尚無明確的關(guān)于CXCL13與重癥肌無力發(fā)病機(jī)制相互關(guān)系的報(bào)道。 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力動(dòng)物模型是研究重癥肌無力發(fā)病機(jī)制的重要工具之一。目前，建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力動(dòng)物模型有主動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫兩種方法，但是各有優(yōu)缺點(diǎn)。一直以來，人類也在不斷地探索，尋求建立完美的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的方法，但尚未達(dá)

4、成這一目標(biāo)。 目的:通過檢測(cè)CXCL13在重癥肌無力患者血清中的水平以及CXCL13 mRNA在胸腺組織表達(dá)水平，來探討CXCL13在重癥肌無力的發(fā)病中的地位和作用，并闡述其在治療研究中的價(jià)值。本研究擬通過被動(dòng)移植重癥肌無力患者增生的胸腺的方法建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，為研究重癥肌無力的發(fā)病機(jī)制提供了一種新的實(shí)驗(yàn)工具。 方法:收集湘雅醫(yī)院胸外科、神經(jīng)內(nèi)科重癥肌無力患者治療前及治療后一周、一個(gè)月的血液標(biāo)本各54份及健康體檢者血液標(biāo)

5、本30份，用ELISA方法檢測(cè)CXCL13在血清中的濃度。收集20例胸腺增生合并重癥肌無力住院手術(shù)患者的胸腺標(biāo)本及10例先天性心臟病手術(shù)患者胸腺組織標(biāo)本，同時(shí)進(jìn)行胸腺組織培養(yǎng)，用ELISA方法檢測(cè)CXCL13在胸腺組織培養(yǎng)液上清中的水平，同時(shí)用RT-PCR的方法檢測(cè)CXCL13mRNA在胸腺組織的表達(dá)水平，分析CXCL13、胸腺與重癥肌無力三者之間的關(guān)系。將重癥肌無力患者增生的胸腺組織被動(dòng)移植到BALB/c裸小鼠腹腔建立重癥肌無力動(dòng)物模

6、型，并通過癥狀觀察、電生理檢測(cè)、免疫組化、透射電鏡和乙酰膽堿受體計(jì)數(shù)的方法來評(píng)價(jià)該動(dòng)物模型，分析其用于重癥肌無力發(fā)病機(jī)制研究中的意義。 結(jié)果:54份重癥肌無力患者血清中CXCL13的濃度水平明顯高于正常對(duì)照組(p<0.05)，在接受了腎上腺皮質(zhì)激素治療或胸腺切除手術(shù)的一個(gè)月之后，患者血清中CXCL13濃度水平較治療之前有明顯下降(p<0.01)，而CXCL13在眼肌型重癥肌無力和全身型重癥肌無力患者血清中的濃度水平無明顯差異(p

7、>0.05)；CXCL13在重癥肌無力患者胸腺組織培養(yǎng)上清液中濃度水平顯著高于正常對(duì)照組(p<0.01)，而在培養(yǎng)液中加入地塞米松后，其濃度水平會(huì)明顯下降，并且與地塞米松的劑量呈負(fù)相關(guān)，而且在增生的胸腺組織中，CXCL13 mRNA的表達(dá)水平也顯著高于正常胸腺組織(p<0.01)；在建立重癥肌無力實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的研究中，25只實(shí)驗(yàn)組小鼠有9只(36％)出現(xiàn)了肌無力的表現(xiàn)，并通過電生理檢測(cè)、免疫組化、透射電鏡和乙酰膽堿受體計(jì)數(shù)的方法檢測(cè)證實(shí)

8、其組織改變與人類重癥肌無力組織改變相近。 結(jié)論: CXCL13在重癥肌無力患者血清中的濃度較正常人群明顯增高，但在經(jīng)過激素治療和胸腺切除之后，其在血清中的濃度會(huì)緩慢下降，說明其可能可以作為重癥肌無力患者血清指標(biāo)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其水平變化可作為患者對(duì)治療的反應(yīng)性檢測(cè)指標(biāo)；CXCL13有可能成為評(píng)價(jià)重癥肌無力患者預(yù)后的指標(biāo)之一；在重癥肌無力患者的增生胸腺組織中，存在著CXCL13 mRNA的大量表達(dá)，從而導(dǎo)致了CXCL13在組織培養(yǎng)上清液

9、中及血清中水平增加，胸腺CXCL13的產(chǎn)生中扮演了重要角色。；地塞米松可直接抑制胸腺產(chǎn)生CXCL13；CXCL13有可能成為重癥肌無力治療研究的新靶點(diǎn)；通過將重癥肌無力患者的胸腺組織被動(dòng)轉(zhuǎn)移至BALB/c裸小鼠腹腔的方法，可以成功建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力動(dòng)物模型，此模型可作為研究胸腺與MG發(fā)病機(jī)制關(guān)系的實(shí)驗(yàn)工具。 創(chuàng)新點(diǎn): 1、首次通過ELISA方法和PT-PCR方法測(cè)定血清中CXCL13濃度水平及胸腺組織中CXC

10、L13 mRNA的表達(dá)，從而評(píng)價(jià)了CXCL13、胸腺、重癥肌無力三者之間的關(guān)系。 2、通過胸腺組織塊培養(yǎng)模擬胸腺在體內(nèi)生長的環(huán)境，并加用地塞米松進(jìn)行干預(yù)，從而證明地塞米松可抑制胸腺產(chǎn)生CXCL13，為將來重癥肌無力治療的研究提供一個(gè)新的切入點(diǎn)。 3、首次采用將MG患者增生胸腺組織被動(dòng)轉(zhuǎn)移到BALB/c裸小鼠腹腔的方法成功建立了重癥肌無力動(dòng)物模型，該模型可更好地用于胸腺與MG發(fā)病關(guān)系的進(jìn)一步研究，為MG發(fā)病機(jī)制的研究工作提