IL-17和CXCL-13在大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力及人胸腺瘤合并重癥肌無(wú)力中的作用.pdf

1、背景及目的:
　　重癥肌無(wú)力(myasthenia gravis，MG)是由抗乙酰肌堿受體抗體(acetylcholinereceptor antibody，AChR-Ab)介導(dǎo)，針對(duì)神經(jīng)肌肉接頭(neuromuscularj unction，NMJ)突觸后膜上乙酰膽堿受體(acetylcholine receptor，AChR)進(jìn)行性破壞的一種自身免疫性疾病。目前MG尚無(wú)特異性治療方法，因此迫切需要明確MG的發(fā)病機(jī)制。實(shí)驗(yàn)性自身

2、免疫性重癥肌無(wú)力（experimental autoimmune myasthenia gravis，EAMG）是MG的一種可靠動(dòng)物模型，兩者在臨床表現(xiàn)、電生理學(xué)及免疫學(xué)上都具有很大的相似性。EAMG多以電鰻器官AChR為免疫抗原，但其在國(guó)內(nèi)很難獲得，故需要一種簡(jiǎn)單易行成功率高的建立重癥肌無(wú)力模型的方法。
　　研究表明Th17在MG/EAMG的發(fā)病機(jī)制中具有十分重要的作用，在EAMG發(fā)病機(jī)制中Th17輔助B細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體不依賴于

3、Th1。CXCL13是一種在免疫反應(yīng)中其重要作用的趨化細(xì)胞因子，在B淋巴細(xì)胞尋靶和遷移到淋巴組織中T和B細(xì)胞區(qū)起重要作用。最近報(bào)道體外人Th17克隆表達(dá)CXCL13，而Th1和Th2不表達(dá)。那么在大鼠EAMG中IL-17與CXCL13表達(dá)水平的關(guān)系需進(jìn)一步證實(shí)。
　　10％～20％的MG患者合并有胸腺瘤，33％-75％的胸腺瘤患者同時(shí)合并有重癥肌無(wú)力。行胸腺切除術(shù)后重癥肌無(wú)力的臨床癥狀減輕以及痊愈的患者占70％。因此我們認(rèn)為胸腺瘤

4、和重癥肌無(wú)力的發(fā)生有著密切的關(guān)系。但胸腺瘤合并MG的機(jī)制目前還不是很清楚，探討IL-17和CXCL-13及CD4+T在人胸腺瘤合并MG發(fā)病機(jī)制中的作用非常重要。
　　本研究以大鼠EAMG和27例胸腺瘤患者為研究對(duì)象，探討結(jié)核桿菌H37RA劑量與EAMG發(fā)病相關(guān)性，IL-17和CXCL13在EAMG和胸腺瘤合并MG中的表達(dá)及相關(guān)性，旨在探討建立高成功率EAMG的方法，揭示IL-17和CXCL13在MG發(fā)病機(jī)制中的作用，為臨床治療提供

5、新靶點(diǎn)。
　　方法:
　　1.H37Ra在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力模型中的作用:用大鼠AChRα亞單位97-116肽段(DGDFAIVKFTKVLLDYTGHI)、完全弗氏佐劑并輔以結(jié)核桿菌H37RA作抗原建立Lewis大鼠EAMG動(dòng)物模型。通過(guò)對(duì)大鼠EAMG的臨床評(píng)分觀察來(lái)發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌素在模型建立中的作用。
　　2.IL-17和CXCL-13在EAMG發(fā)病機(jī)制中的作用:在用肽段免疫建立大鼠EAMG同時(shí)給予外源性IL-

6、17， ELISA法檢測(cè)大鼠脾、淋巴結(jié)上清液和血清CXCL13水平，大鼠血清IgG1，IgG2a，IgG2b抗體水平，與PBS對(duì)照組比較。
　　3.IL-17和CXCL-13在胸腺瘤合并MG中的作用:回顧分析患者的相關(guān)臨床資料，并對(duì)胸腺瘤組織蠟塊進(jìn)行IL-17、CXCL-13和CD4+免疫組化研究，然后將結(jié)果與相關(guān)臨床資料進(jìn)行比較，探討IL-17和CXCL-13在胸腺瘤合并重癥肌無(wú)力中的作用。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPS

7、S17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有顯著性意義。
　　結(jié)果:
　　1.用大鼠AChR-α亞單位97-116肽段免疫Lewis大鼠后，出現(xiàn)兩個(gè)發(fā)病時(shí)相，分別開(kāi)始于免疫后第7天、第35天左右，并分別于第15天和第40天左右達(dá)到發(fā)病高峰。增加H37Ra的劑量，大鼠EAMG發(fā)病率高達(dá)75％，且其癥狀明顯加重。
　　2.EAMG大鼠脾、淋巴結(jié)細(xì)胞上清液和血清中的CXCL13水平均高于空白對(duì)照組。給予

8、外源性IL-17的實(shí)驗(yàn)組大鼠血清AChR特異性抗體Ig2b明顯高于給予PBS注射的對(duì)照組，脾、淋巴結(jié)細(xì)胞上清液和血清中的CXCL13水平均高于給予PBS注射的對(duì)照組。
　　3.B1、B2和B3型為主的胸腺瘤合并MG的可能性較大分別為50％、60％和66.7％，而C型同時(shí)合并MG的可能性非常小，而良性的胸腺瘤并發(fā)重癥肌無(wú)力的概率越大，且主要為Ⅱ型，淋巴細(xì)胞型胸腺瘤易伴發(fā)重癥肌無(wú)力。胸腺瘤合并MG的胸腺瘤組織高表達(dá)細(xì)胞因子IL-17和