凋亡相關基因在胸腺瘤合并重癥肌無力患者病因研究中的意義.pdf

1、胸腺瘤是較常見的胸外科疾病，約有50％的胸腺瘤病人伴重癥肌無力，對其病因診斷和治療都有一定困難。有些病例術后癥狀長期不緩解甚至惡化，嚴重困擾患者和診治醫(yī)生。特別在臨床研究發(fā)現(xiàn)，盡管年齡、性別、社會經(jīng)濟地位等一些社會因素相同，組織學類型、分化等病理學改變相同的胸腺瘤病人，有些合并重癥肌無力，有些則不合并重癥肌無力。這就使我們從基因水平進行考慮是否是由于胸腺瘤本身或胸腺瘤存在引起瘤旁胸腺組織細胞內與自身免疫疾病有關的基因發(fā)生了某種變異，而導

2、致機體免疫功能的紊亂所致。本研究通過檢測胸腺瘤合并MG患者瘤組織中凋亡相關基因的表達水平來探討胸腺瘤組織的細胞凋亡狀態(tài)與MG發(fā)病的關系，進而探討MG的病因。 材料和方法: 一、材料 (一)研究對象 所有標本取自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院。胸腺瘤伴重癥肌無力組23例。參考WHO1999年胸腺腫瘤國際組織學分類，其中A型3例、AB型10例、B1型5例、B2型3例、B3型2例。均經(jīng)新斯的明及肌電圖檢查陽性確診MG

3、，術后病理確診胸腺瘤。胸腺瘤非重癥肌無力組：18例。參考WHO1999年胸腺腫瘤國際組織學分類，其中A型1例、AB型8例、B1型5例、B2型2例、B3型2例。術前檢查患者無MG及其它自身免疫性疾病，術后病理確診胸腺瘤。 (二)主要試劑、儀器和來源 多克隆兔抗人Fas抗體、單克隆鼠抗人Bcl—2抗體、免疫組化S-P試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術有限公司；美國Thermo自動免疫組化儀． 二、方法

4、 (一)實驗方法：用鏈霉素抗生物素蛋白—過氧化物酶免疫組化法(S-P法)檢測Fas和Bcl—2的表達。結果判定：Fas和Bcl—2蛋白定位于細胞膜和細胞漿，細胞膜和細胞漿內見棕黃色顆粒為陽性。由3名有經(jīng)驗的病理醫(yī)師在雙盲法下獨立計數(shù)。染色切片上陽性細胞數(shù)大于10％者判定為陽性標本[5]。陽性細胞數(shù)10～24％為(+)；陽性細胞數(shù)25～49％為(++)；陽性細胞數(shù)50～74％為(+++)；陽性細胞數(shù)大于75％為(++++)。

5、(二)統(tǒng)計學分析：對所得結果各組間采用等級資料兩個獨立樣本比較的Wilcoxon秩和檢驗，P<0.05有統(tǒng)計學意義。 結果: 一、切片HE染色觀測結果 正常胸腺組織結構完整，髓質及皮質分界清楚，小葉間由大量纖維組織及脂肪組織充填。高齡患者與低齡患者比較，只是胸腺脂肪組織所占比例增高而已。 胸腺瘤組織由上皮細胞與淋巴細胞以不同比例混合組成。上皮細胞為圓形或卵圓形，體積較淋巴細胞大，分布于整個胸腺中，無皮質髓

6、質之分，結構單一，胞漿量少，細胞核染色較淺。 二、兩組標本Fas和Bcl—2檢測結果 Fas和Bcl—2陽性染色可在細胞膜或細胞漿呈棕黃色。Fas和Bcl—2陽性細胞在正常胸腺的髓質及皮質均有分布，但Bcl—2以髓質為。Fas和Bcl—2陽性細胞在胸腺瘤組織中呈均勻分布，F(xiàn)as陽性細胞主要分布在上皮細胞為主的腫瘤細胞中，Bcl—2陽性細胞主要分布在淋巴細胞為主的腫瘤細胞中。胸腺瘤伴重癥肌無力組Fas的表達水平明顯高于胸腺

7、瘤非重癥肌無力組(Fas：u=3.802，P<0.01)；胸腺瘤伴重癥肌無力組Bcl—2的表達水平明顯低于胸腺瘤非重癥肌無力組(Bcl—2： u=2.873，P<0.01)。 結論: 1、胸腺瘤伴重癥肌無力組與胸腺瘤非重癥肌無力組Fas陽性細胞數(shù)的顯著差異，提示Fas在胸腺瘤伴重癥肌無力患者的發(fā)病中有重要意義。 2、胸腺瘤伴重癥肌無力組與胸腺瘤非重癥肌無力組Bcl—2陽性細胞數(shù)的顯著差異，提示Bcl—2在胸腺瘤伴