燒傷變性真皮基質(zhì)可再生利用的初步研究.pdf

1、背景：深Ⅱ度及混合度燒傷創(chuàng)面的治療，尤其是功能部位的治療，一直是燒傷外科領(lǐng)域研究的重點和難點。應(yīng)用無細(xì)胞真皮替代物與自體刃厚皮或培養(yǎng)表皮片復(fù)合移植治療大面積燒傷創(chuàng)面能夠明顯減輕皮片瘢痕增生和攣縮畸形的產(chǎn)生。然而異源性支架材料的價格昂貴且存在免疫原性，很難滿足燒傷整形患者大面積移植的需要。近年研究表明，保留燒傷變性真皮，并復(fù)合移植整張自體中厚或薄中厚皮片治療深Ⅱ度及混合度燒傷創(chuàng)面，術(shù)后患處外形及功能恢復(fù)良好，提示燒傷變性皮膚具有可逆性恢復(fù)

2、正常真皮形態(tài)和功能的特點。大面積燒傷患者切痂術(shù)后丟棄的變性皮膚是否可再利用成為本課題研究的重點，旨在探討燒傷變性真皮基質(zhì)(DDM)的制備方法、組織相容性以及作為真皮替代物修復(fù)深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的可行性。
　　 方法：采用Trypsin+TritonX-100脫細(xì)胞方法，分別對大鼠深Ⅱ度燙傷后第1、3、7d皮膚進(jìn)行脫細(xì)胞等處理，制備DDM，即DDM-1d、DDM-3d、DDM-7d。相同方法制備大鼠脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(ADM)作為對照。對

3、DDM和ADM分別行大體、光鏡、超微結(jié)構(gòu)觀察及微生物學(xué)和生物力學(xué)相關(guān)檢測，并通過HE染色、酶聯(lián)免疫、流式細(xì)胞學(xué)等試驗技術(shù)，觀察（變性的）真皮細(xì)胞外基質(zhì)在大鼠異體埋植3d、1w、2w、4w時，膠原變化、組織相容性和炎癥免疫反應(yīng)。
　　 結(jié)果：DDM呈乳黃色，質(zhì)地柔軟，有一定的韌性和伸展性，彈性較ADM差。鏡下膠原纖維增粗、排列紊亂、疏松，嗜伊紅性增強(qiáng)，無細(xì)胞、血管、毛囊等成分存在。離體微生物培養(yǎng)呈陰性。DDM-ld、DDM-3d及

4、DDM-7d之間生物力學(xué)相關(guān)性能指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;DDM-1d、DDM-3d及DDM-7d與對照組兩兩比較各項指標(biāo)差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。大鼠背部埋植實驗:大體觀察，術(shù)后各組大鼠創(chuàng)口周圍皮膚無明顯腫脹及炎性反應(yīng)，切口愈合良好，移植物與創(chuàng)面組織愈著緊密。組織學(xué)觀察，DDM及ADM植入3d時，可見成纖維細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等浸潤。植入1周時，各支架內(nèi)可見大量成纖維細(xì)胞侵入、增生，并沿膠原纖維方向分布，

5、新生毛細(xì)血管向移植物內(nèi)部延伸。其中DDM表皮面的細(xì)胞浸潤及血管長入較真皮面多，以DDM-3d組為著。各組白細(xì)胞介素4(IL-4)、γ-干擾素(INF-γ)、白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素12(IL-12)、腫瘤壞死因子-Q(TNF-α)，表達(dá)水平較前期增加。實驗組與ADM組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。2周時，埋植的脫細(xì)胞變性真皮基質(zhì)呈粉紅色，表面可見細(xì)小散在的紅點。支架內(nèi)見較多成纖維細(xì)胞浸潤和血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，支架中存在大量

6、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及少量巨噬細(xì)胞浸潤。其中DDM-3d組支架中成纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管數(shù)量稍多。各組IL-4、IL-6、γ-干擾素、TNF-Q、IL-12表達(dá)量均于2周時達(dá)到高峰，其中DDM-3d組γ-干擾素升高最為顯著(P＜0.05)。4周時，移植物內(nèi)血管數(shù)量進(jìn)一步增多，并在移植物內(nèi)廣泛分布，IL-4、IL-6、γ-干擾素、TNF-Q、IL-12表達(dá)水平均下降。
　　 結(jié)論：DDM來源廣泛、制各方法簡單，移植物生物相容性好，沒有