微孔化燒傷變性真皮聯(lián)合脂肪干細(xì)胞構(gòu)建人工復(fù)合皮的初步研究.pdf

1、目的：
　　利用脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells ADSCs）在體外聯(lián)合激光微孔化燒傷變性真皮基質(zhì)（laser micropore denatured dermal matrix LP-DDM）構(gòu)建人工復(fù)合皮，通過觀察和分析其生物相容性及移植后血管化等效果，以期獲得一種新型復(fù)合皮。
　　方法：
　　1、取健康雄性SD大鼠腎周脂肪，體外分離培養(yǎng)ADSCs并進(jìn)行成脂、成骨分化實驗，對ADSC

2、s表面標(biāo)記物CD29、CD45、CD90進(jìn)行流式細(xì)胞檢測；切取 SD大鼠背部深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面處全厚皮并進(jìn)行脫細(xì)胞和激光微孔處理得到LP-DDM；將ADSCs種植于LP-DDM上觀察細(xì)胞的種植情況并構(gòu)建成人工復(fù)合皮；2、取16只雄性健康SD大鼠，隨機分為4組，分別設(shè)為A組：移植DDM、B組：移植DDM+ADSCs、C組：移植LP-DDM、D組：移植LP-DDM+ADSCs，每只大鼠背部設(shè)計1個大小約2cm?2cm的皮瓣，按照分組將材料包埋植

3、入皮下并縫合皮膚，每組分別在包埋移植術(shù)后第7天、14天、21天、28天時大體觀察移植皮片與周圍組織的相容性及血管化情況，并取組織進(jìn)行 HE染色觀察其變化。
　　結(jié)果：
　　1、原代培養(yǎng)的ADSCs呈星型或多角形，傳代后的ADSCs呈現(xiàn)長梭形，成纖維細(xì)胞樣、漩渦樣生長。ADSCs成脂誘導(dǎo)分化4周后觀察到油紅O染色后大而圓狀脂滴，ADSCs成骨誘導(dǎo)分化4周后觀察茜素紅染色后的鈣沉淀；流式細(xì)胞儀檢測ADSCs表面標(biāo)記物結(jié)果示CD4

4、5陰性表達(dá)（0.70％）的同時CD29、CD90陽性表達(dá)率為93.4%。ADSCs與LP-DDM共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)ADSCs可順利接種并生長于LP-DDM上，DAPI熒光染色后通過熒光顯微鏡觀察到定植于支架材料上的ADSCs呈現(xiàn)藍(lán)色熒光，并且細(xì)胞增長速率與對照組相比無明顯差異（P＞0.05），另外通過CCK-8標(biāo)記后測定OD值，LP-DDM組和DDM組與對照組比較無明顯差異（P＞0.05），表明 LP-DDM、DDM并不會造成細(xì)胞毒性作用，且細(xì)

5、胞增殖復(fù)制能力強，細(xì)胞活力好。2、動物實驗：（1）大體觀察：移植術(shù)后14天可見A、B、C、D四組少量紅色血管組織出現(xiàn)在皮片周圍；移植術(shù)后28天，肉眼見D組皮片周圍形成較多紅色血管樣組織，較其他3組更為密集，并且與皮下周圍組織緊密融合，部分皮片顏色由乳黃色逐漸變?yōu)榉奂t色，并在植入皮片的表面可見散在的小紅點。（2）組織學(xué)觀察（HE染色）：第14天見C、D組皮片周圍均出現(xiàn)少量血管浸潤現(xiàn)象，A組血管浸潤少，4組皮片周邊均可見炎性細(xì)胞存在。第28

6、天，A組中少量血管浸潤，與正常組織相接的邊界清晰，B組可見少量血管浸潤現(xiàn)象，伴有脂肪樣結(jié)締組織，C組見有較多血管浸潤，D組可見復(fù)合皮邊界與內(nèi)部均出現(xiàn)大量血管浸潤，并伴有脂肪樣結(jié)締組織生成，鏡下見炎癥細(xì)胞逐漸減少，其邊界基本與正常組織相融合。
　　結(jié)論：
　　新型人工復(fù)合皮移植后發(fā)現(xiàn)其生物相容性好，未出現(xiàn)明顯的免疫排斥反應(yīng)，具有加速組織血管化、向脂肪樣組織分化的作用，為今后此種復(fù)合皮在創(chuàng)面愈合方面的相關(guān)研究以及臨床應(yīng)用提供了實