表皮干細(xì)胞聯(lián)合脫細(xì)胞真皮構(gòu)建人工皮膚促進(jìn)創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 采用表皮干細(xì)胞聯(lián)合脫細(xì)胞真皮構(gòu)建人工皮膚并移植修復(fù)兔全層皮膚缺損創(chuàng)面，觀察創(chuàng)面修復(fù)效果和局部皮膚組織白介素10與腫瘤壞死因子-α的表達(dá)變化。 方法： （1）取因創(chuàng)傷等原因致意外流產(chǎn)的的妊娠24～26周齡胎兒皮膚標(biāo)本，用胰蛋白酶和EDTA聯(lián)合消化法分離表皮，用Ⅳ型膠原快速粘附法分離純化人表皮干細(xì)胞，以含表皮生長(zhǎng)因子、角質(zhì)細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)液等組成的表皮干細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)，測(cè)定克隆形成率。（2）制備脫細(xì)胞真

2、皮將體外培養(yǎng)的人表皮干細(xì)胞接種到脫細(xì)胞真皮支架中，構(gòu)建組織工程人工皮膚。（3）取新西蘭白兔常規(guī)制作背部全層皮膚缺損創(chuàng)面隨機(jī)分為四組，A組用含表皮干細(xì)胞的組織工程皮膚移植于皮膚缺損創(chuàng)面；B組用含角質(zhì)細(xì)胞的組織工程皮膚移植于皮膚缺損創(chuàng)面；C組用單純脫細(xì)胞真皮移植于皮膚缺損創(chuàng)面；D組用創(chuàng)面空置為對(duì)照。觀察創(chuàng)面修復(fù)情況，局部炎癥反應(yīng)，創(chuàng)面愈合時(shí)間。各組分別于術(shù)后在部分創(chuàng)面取材行常規(guī)HE染色和IL-10、TNF-α免疫組織化學(xué)染色觀察。

3、結(jié)果： 體外培養(yǎng)的人表皮干細(xì)胞增殖穩(wěn)定，克隆形成率明顯高于角質(zhì)細(xì)胞對(duì)照組。制備脫細(xì)胞真皮柔軟有韌性，HE染色顯示已去除表皮，真皮內(nèi)未見(jiàn)細(xì)胞及碎屑存在，膠原排列規(guī)則。表皮干細(xì)胞接種于脫細(xì)胞真皮后增殖良好，HE染色可見(jiàn)較多的細(xì)胞分布于真皮支架中。含表皮干細(xì)胞的人工皮膚移植后創(chuàng)面愈合良好，局部炎癥反應(yīng)輕微，無(wú)出血、積膿、壞死，創(chuàng)面愈合時(shí)間較角質(zhì)細(xì)胞對(duì)照組明顯縮短。IL-10免疫組化染色顯示四組均有表達(dá)，其中A組表達(dá)最強(qiáng)，B組表達(dá)次之，