蛛網(wǎng)膜下腔注射Plv-UbC-HPPE-HEK293細(xì)胞對(duì)骨癌痛大鼠行為學(xué)以及脊髓背角GLAST的影響.pdf

1、研究背景：
　　 骨癌痛是一種機(jī)制獨(dú)特而復(fù)雜的慢性疼痛，局部腫瘤骨組織的各種變化誘導(dǎo)了神經(jīng)系統(tǒng)的外周敏化和中樞敏化。研究發(fā)現(xiàn)在骨癌痛大鼠的脊髓背角出現(xiàn)特有的大量肥大的星形膠質(zhì)細(xì)胞[1]。興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體是維持突觸間隙谷氨酸濃度的主要調(diào)節(jié)器，在已知的5種EAATs亞型中，表達(dá)于膠質(zhì)細(xì)胞的GLAST(EAAT1)在清除谷氨酸過(guò)程中的作用很大[2]。疼痛與脊髓膠質(zhì)細(xì)胞功能改變和GLAST表達(dá)密切相關(guān)。腦啡肽作為一種內(nèi)源性阿片肽類(lèi)鎮(zhèn)痛

2、物質(zhì)日益受到關(guān)注，許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已表明其有明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[3]。轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛為疼痛治療帶來(lái)新的方向，本實(shí)驗(yàn)小組前期利用慢病毒載體包裝入前腦啡肽原基因(Human preproenkephalin gene,HPPE)，成功篩選出能穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株(Plv-UbC-HPPE/HEK293)，以及其對(duì)照細(xì)胞株(UbC-GFP-LV/HEK293)，現(xiàn)將其注射到骨癌模型大鼠的蛛網(wǎng)膜下腔，觀察其對(duì)大鼠骨癌痛行為學(xué)和脊髓背角GLAST/EAA

3、T1的表達(dá)影響。
　　 目的：
　　 觀察蛛網(wǎng)膜下腔注射Plv-UbC-HPPE/HEK293細(xì)胞對(duì)骨癌痛大鼠行為學(xué)以及脊髓背角谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(GLAST/EAAT1)表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 60只健康雌性SD大鼠，隨機(jī)分為4組(n=15)，假骨癌空白對(duì)照組(A)、骨癌模型組(B)、骨癌模型鞘內(nèi)注射UbC-GFP-LV/HEK293對(duì)照組(C)、骨癌模型鞘內(nèi)注射Plv-UbC-HPPE/HEK

4、293細(xì)胞治療組(D)。造模術(shù)前1d，術(shù)后1、5、10、15、20、21、23、25d測(cè)定各組大鼠后肢縮足潛伏期(Pawwithdrawallatency,PWL)。C組和D組分別于造模術(shù)后第20d蛛網(wǎng)膜下腔注射UbC-GFP-LV/HEK293細(xì)胞和Plv-UbC-HPPE/HEK293細(xì)胞。造模術(shù)后25d取各組大鼠L4～L6脊髓，以免疫組化方法檢測(cè)脊髓背角GLAST的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 B、C組大鼠與對(duì)照組(

5、A)相比，大鼠PWL逐漸降低（P＜0.05），GLAST表達(dá)降低(P＜0.05)；D組大鼠鞘內(nèi)注射Plv-UbC-HPPE/HEK293細(xì)胞后PWL升高（P＜0.05），GLAST蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 (1)SD大鼠脛骨注射MADB-106乳腺癌細(xì)胞株可引起行走誘發(fā)痛、自發(fā)性痛敏、熱痛覺(jué)過(guò)敏和觸誘發(fā)痛等痛行為學(xué)變化，大鼠造模側(cè)脛骨X線檢查也證明了大鼠骨癌痛模型成功建立。(2)鞘內(nèi)注射質(zhì)粒