bcl-2基因修飾雪旺細(xì)胞蛛網(wǎng)膜下腔移植修復(fù)大鼠脊髓損傷.pdf

1、目的:探討bcl-2基因轉(zhuǎn)染雪旺細(xì)胞蛛網(wǎng)膜下腔移植對脊髓損傷大鼠損傷神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。方法:體外培養(yǎng)大鼠雪旺細(xì)胞，經(jīng)Ad-EGFP為載體介導(dǎo)端B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(bcl-2)基因轉(zhuǎn)染雪旺細(xì)胞，分為3組:對照組、陰性轉(zhuǎn)染組及bcl-2轉(zhuǎn)染組。Western blot檢測雪旺細(xì)胞被轉(zhuǎn)染后第3天和第14天的bcl-2蛋白的表達(dá)。選取成年雌性SD大鼠83只，成功造模72只，隨機(jī)分為對照組，SCs組及bcl-2-SCs組，每組24只。依據(jù)改良

2、Allen打擊法建造大鼠急性脊髓損傷模型，分別于造模前、造模后1天、3天、1周、2周、3周、4周進(jìn)行BBB、斜板試驗(yàn)及改良Tarlov方法對各組大鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能評(píng)定。造模后7天通過RT-PCR及Western blot檢測檢測脊髓損傷區(qū)周圍膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)、神經(jīng)絲蛋白（NF-200）的表達(dá)，采用TUNEL法檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況，造模后4周取材行病理切片HE染色及熒光顯微鏡觀測EGFP標(biāo)記的SCs存活及分布情況，HRP逆行示

3、蹤檢測神經(jīng)纖維修復(fù)情況，通過SEP和MEP觀察大鼠神經(jīng)電生理恢復(fù)情況。結(jié)果:Western blot結(jié)果顯示Ad-EGFP介導(dǎo)的bcl-2基因轉(zhuǎn)染大鼠雪旺細(xì)胞體外能穩(wěn)定表達(dá)bcl-2;大鼠下肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià)bcl-2-SCs組優(yōu)于SCs組，SCs組優(yōu)于對照組。造模完成72h，bcl-2-SCs組細(xì)胞凋亡數(shù)均明顯低于其他兩組(P＜0.05)。造模后7天，與對照組和SCs組相比，bcl-2-SCs組GFAP、NF-200基因和蛋白的表達(dá)均較顯

4、著升高P＜0.05）。造模后4周，HE染色對照組可見脊髓組織缺失及脊髓空洞形成，無神經(jīng)軸索通過。SCs組損傷區(qū)可見少量神經(jīng)軸索樣結(jié)構(gòu)，脊髓空洞較小，bcl-2-SCs組可見較多神經(jīng)軸索樣結(jié)構(gòu)，未見脊髓空洞。EGFP標(biāo)記的陽性細(xì)胞數(shù):bcl-2-SCs組多于SCs組，對照組數(shù)量最少，各組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。HRP陽性神經(jīng)纖維數(shù):bcl-2-SCs組＞SCs組＞對照組，各組之間有顯著性(P＜0.05)。造模后4周，SEP和ME