被修飾的PLGA介導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞和雪旺細(xì)胞聯(lián)合移植修復(fù)脊髓損傷.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察神經(jīng)干細(xì)胞和雪旺細(xì)胞以經(jīng)修飾的PLGA為支架構(gòu)成的分子器件聯(lián)合移植入脊髓損傷區(qū)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞定向生長(zhǎng)，使脊髓損傷的修復(fù)成為現(xiàn)實(shí)，為臨床治療脊髓損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，可能成為治療脊髓損傷的一種新方法。同時(shí)探討PLGA分子器件作為神經(jīng)組織工程材料的可行性。 方法:疏水蛋白HFBI修飾聚乳酸一乙醇酸[Poly(D，L-lactide-co-glycolicacid)，PLGA]表面后，通過(guò)微印跡技術(shù)將胎牛血清印跡在

2、被修飾的PLGA上，形成條帶狀。神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)5-溴脫氧尿嘧啶標(biāo)記后，將神經(jīng)干細(xì)胞和雪旺細(xì)胞種植在被修飾的PLGA上觀察細(xì)胞貼附和生長(zhǎng)。40只Wistar大鼠建立大鼠脊髓半橫斷動(dòng)物模型并隨機(jī)分為4組：對(duì)照組(被修飾的PLGA)，SCs移植組(雪旺細(xì)胞+被修飾的PLGA)，NSCs移植組(神經(jīng)干細(xì)胞+被修飾的PLGA)，聯(lián)合細(xì)胞移植組(神經(jīng)干細(xì)胞+雪旺細(xì)胞+被修飾的PLGA)。將種植有神經(jīng)干細(xì)胞和雪旺細(xì)胞的被修飾的PLGA卷曲形成三維支架移

3、植于脊髓損傷區(qū)。8周后進(jìn)行BBB評(píng)分，病理組織學(xué)，免疫組織化學(xué)，免疫熒光，HRP逆行示蹤，電生理檢測(cè)，電鏡觀察修復(fù)的情況。 結(jié)果:結(jié)果顯示將PLGA分子器件移植于脊髓損傷區(qū)8周后，BBB評(píng)分細(xì)胞移植組都高于對(duì)照組(P<0.05)；聯(lián)合細(xì)胞移植組BBB評(píng)分最高(P<0.05)。光鏡可觀察到移植中心部有成活的神經(jīng)細(xì)胞，大量軸索長(zhǎng)人移植物，融合較好。對(duì)照組神經(jīng)纖維稀疏，大量膠質(zhì)細(xì)胞聚集形成瘢痕，白質(zhì)、灰質(zhì)界限消失，被大量膠質(zhì)細(xì)胞填充或

4、有空洞形成，形成的膠質(zhì)瘢痕形狀不規(guī)則。在脊髓半橫斷損傷后立即進(jìn)行SEP檢測(cè)，各組動(dòng)物的誘發(fā)電位波形完全消失；移植術(shù)后8周，聯(lián)合細(xì)胞移植組體感誘發(fā)電位明顯恢復(fù)，較其它組潛伏期縮短，波幅增高。聯(lián)合細(xì)胞移植組可觀察到大量辣根過(guò)氧化物酶陽(yáng)性標(biāo)記物和標(biāo)記的神經(jīng)細(xì)胞。透射電鏡可觀察到對(duì)照組中以膠質(zhì)瘢痕為主，較少有有髓神經(jīng)纖維。在聯(lián)合細(xì)胞移植組中，有大量的有髓神經(jīng)纖維及無(wú)髓神經(jīng)纖維。 結(jié)論:神經(jīng)干細(xì)胞和雪旺細(xì)胞在被修飾的PLGA的軌道上，很容