GDNF基因修飾的嗅鞘細(xì)胞移植對(duì)大鼠脊髓損傷的治療作用.pdf

1、青島大學(xué)碩士學(xué)位論文GDNF基因修飾的嗅鞘細(xì)胞移植對(duì)大鼠脊髓損傷的治療作用姓名：劉麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：崔瑞耀2003.4.20中文摘要25月成年SD大鼠的嗅球分離、培養(yǎng)和純化OECs。結(jié)果發(fā)現(xiàn)差速貼壁法比阿糖胞苷抑制法所得細(xì)胞純度高。根據(jù)p75NGFR、S100、GFAP免疫細(xì)胞熒光染色鑒定OECs。(2)OECsGDNF基因工程細(xì)胞的成功建立應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PN2AGDNF。采用陽(yáng)離子脂質(zhì)

2、體轉(zhuǎn)染方法將GDNF轉(zhuǎn)入PA317細(xì)胞，用G418篩選陽(yáng)性克隆，建立PA317一GDNF包裝細(xì)胞。利用3T3細(xì)胞測(cè)定病毒滴度上清，把病毒滴度高的上清感染OECs。通過(guò)測(cè)定感染的OECs分泌的GDNF的活性和量，分泌量高的則為基因工程細(xì)胞OECs—GDNF。(3)OECsGDNF對(duì)大鼠脊髓損傷后后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的影響建立成年SD大鼠脊髓Lm全橫斷損傷模型，將體外培養(yǎng)純化的OECs和OECs—GDNF植入脊髓損傷處。按治療手段不同，將實(shí)驗(yàn)大

3、鼠分為對(duì)照組、OECs組和0ECs_GDNF組。采用斜板試驗(yàn)觀察大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)OECs—GDNF組運(yùn)動(dòng)功能比對(duì)照組和OECs組恢復(fù)早；損傷中期OECs—GDNF組和OECs組均比對(duì)照組恢復(fù)得快；OECs_GDNF組比OECs恢復(fù)得快。損傷晚期三者恢復(fù)均減慢。OECs—GDNF組與OECs組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)OECsGDNF對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)元的保護(hù)作用和軸突再生的影響在上述損傷模型和實(shí)驗(yàn)分組的基礎(chǔ)上，8周后，通過(guò)

4、HRP逆行示蹤技術(shù)計(jì)算標(biāo)記的皮層神經(jīng)元教量評(píng)價(jià)OECsGDNF對(duì)皮層神經(jīng)元的逆行性保護(hù)作用，并通過(guò)NF免疫熒光染色觀察OECsGDNF對(duì)纖維再生的影響。結(jié)果表明：OECs—GDNF組皮層神經(jīng)元數(shù)日多于對(duì)照組和OECs組；OECs組皮層神經(jīng)元的數(shù)目多于對(duì)照組；OECs—GDNF組纖維再生明顯優(yōu)于OECs組和對(duì)照組；OECs組優(yōu)于對(duì)照組。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，OECs—GDNF能促進(jìn)大鼠脊髓損傷后后肢運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)；對(duì)皮層神經(jīng)元具有逆行性保護(hù)作用