Ⅰ型干擾素系統(tǒng)在多發(fā)性肌炎-皮肌炎患者和炎性肌病大鼠模型中的表達(dá).pdf

1、特發(fā)性炎性肌病(idiopathic inflammatory myopathies,IIM)是一組以慢性肌肉炎癥反應(yīng)導(dǎo)致進(jìn)行性肌萎縮為特點(diǎn)的系統(tǒng)性自身免疫病,主要包括多發(fā)性肌炎(polymyositis,PM)和皮肌炎(dennatomyositis,DM)。由于病因和病理機(jī)制不明,PM/DM的臨床治療仍以激素和免疫抑制劑為主,缺乏特異性,臨床上出現(xiàn)大量的藥物毒副作用。只有通過(guò)尋找PM/DM的發(fā)病機(jī)理,明確疾病發(fā)生、發(fā)展關(guān)鍵的免疫調(diào)節(jié)

2、通路,才能從中找到PM/DM特異性診斷和病情活動(dòng)性指標(biāo)以及藥物治療的靶點(diǎn),為臨床治愈PM/DM鋪平道路。盡管確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,但PM/DM被認(rèn)為是環(huán)境因素、遺傳因素、感染和淋巴細(xì)胞紊亂等交互作用所致。近年來(lái)國(guó)外基因芯片技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)Ⅰ型干擾素(typeⅠ interferon,IFN)誘導(dǎo)基因與PM/DM臨床活動(dòng)性密切相關(guān)?；蛐酒夹g(shù)是一種能對(duì)致病基因進(jìn)行大規(guī)模高通量同步性檢測(cè)的新技術(shù),但只是初步的定性篩選手段,無(wú)法對(duì)基因及其蛋白

3、的表達(dá)進(jìn)行精確的定量表達(dá)研究,為此還需要對(duì)大樣本的PM/DM患者進(jìn)行Ⅰ型IFN系統(tǒng)蛋白和基因的檢測(cè)來(lái)驗(yàn)證。
　　 本實(shí)驗(yàn)第一部分利用ELISA法檢測(cè)PM/DM患者血清IFNα、IFNβ、IFNγ。實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)患者肌肉組織IFNα、IFNβ、干擾素α受體1(IFNαR1)、信號(hào)傳導(dǎo)蛋白和轉(zhuǎn)錄激活物(signal transducer and activator of transcription1,STAT1)的mRNA表達(dá)

4、水平,免疫組化技術(shù)檢測(cè)BDCA-4在患者肌肉組織中的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PM/DM患者外周血IFNα、IFNβ蛋白表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P均<0.05)；DM組明顯高于PM組(P均<0.05)。血清IFNα和IFNβ水平在伴皮疹的患者組中明顯升高(P均<0.05)；與ESR、CRP水平呈明顯正相關(guān)(P均<0.01)。12例患者經(jīng)治療后:IFNα、IFNβ水平明顯下降(P均<0.01)。PM/DM患者組肌肉的IFNα、IFNβ、STAT1基因

5、表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P均<0.05)。漿樹(shù)突細(xì)胞(plasmacytoiddendritic cell,PDC)是Ⅰ型IFN主要的分泌細(xì)胞,其細(xì)胞表面特異性表達(dá)BDCA-4,研究發(fā)現(xiàn)在患者肌纖維周炎性細(xì)胞中BDCA-4表達(dá)陽(yáng)性。
　　 近年來(lái)發(fā)現(xiàn)間質(zhì)性肺病(interstitial lung disease,ILD)合并感染是PM/DM的主要死亡原因之一,嚴(yán)重影響該病的預(yù)后。由于取材困難,大大影響了對(duì)PM/DM患者肺臟受累發(fā)

6、病機(jī)制的研究。我們實(shí)驗(yàn)室在2005年成功建立了自身免疫性炎性肌病(experimental autoimmune myositis,EAM)的動(dòng)物模型,發(fā)現(xiàn)部分模型肺臟組織同時(shí)受累,表現(xiàn)為不同程度的間質(zhì)性肺泡炎。第二部分實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立了EAM大鼠模型,結(jié)果發(fā)現(xiàn)EAM大鼠模型組的血清CK、IFNα、IFNβ明顯高于對(duì)照組(P值均<0.05)；模型組的肌肉和肺臟組織出現(xiàn)不同程度的病變,其病理評(píng)分與對(duì)照組比較明顯升高(P均<0.05)；模型組肌

7、肉中的IFNα、IFNβ、IFNαR1、STAT1、MxA、IFIT1、ISG15mRNA表達(dá)水高于對(duì)照組(P均<0.05),與血清CK值呈正相關(guān)(P均<0.05),與肌肉病理評(píng)分呈正相關(guān)(P均<0.05)；模型組肺臟中的IFNα、IFNβ、IFNαR1、STAT1、MX1mRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組,并與肺臟病理評(píng)分呈正相關(guān)(P均<0.05)。在模型組的受累肌肉和肺臟均有BDCA-4表達(dá),而對(duì)照組表達(dá)陰性。
　　 本研究證實(shí)PM