版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、非酒精性脂肪性肝?。╪onalcoholic fatty liver disease,NAFLD)與心血管疾病關(guān)系密切,但是兩者相互聯(lián)系的分子機(jī)制還不甚清楚,原因之一就是缺乏合適的動(dòng)物模型。我們擬通過高脂飲食誘導(dǎo)新西蘭兔,觀察高脂飲食下機(jī)體重要器官疾病的發(fā)展過程,建立NAFLD和動(dòng)脈粥樣硬化的復(fù)合模型,為研究聯(lián)系兩者之間的分子機(jī)制建立實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。 線粒體損傷被認(rèn)為是NAFLD從單純性脂肪肝向肝炎進(jìn)展的關(guān)鍵分子機(jī)制,但是NAFLD引
2、起線粒體損傷的機(jī)制尚不明確。脂肪酸(free fatty acid,F(xiàn)FA)能誘導(dǎo)線粒體通透轉(zhuǎn)換孔(mitochondria permeability transition pore,MPT)的瞬間開放,導(dǎo)致線粒體勢(shì)能瞬間崩潰,引起電子泄漏,導(dǎo)致過多活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)生成。ROS通過氧化損傷線粒體蛋白和DNA而引起線粒體功能障礙,損傷的線粒體又繼發(fā)ROS生成增多,形成ROS和線粒體損傷
3、的惡性循環(huán)。同時(shí)過多的ROS耗竭機(jī)體抗氧化系統(tǒng),引起機(jī)體對(duì)繼發(fā)的‘二次’打擊因素敏感性升高。因此我們?cè)O(shè)想NAFLD時(shí),F(xiàn)FA引起的ROS和線粒體損傷的惡性循環(huán)是NAFLD進(jìn)展的分子機(jī)制。姜黃素通過裂解ROS以及上調(diào)抗氧化酶而發(fā)揮抗氧化和保護(hù)線粒體的作用,成為治療NAFLD有前景的藥物。 目的: ⑴建立非酒精性脂肪性肝病與動(dòng)脈粥樣硬化的復(fù)合模型,觀察NAFLD對(duì)心血管的影響。 ⑵探討活性氧自由基(ROS)介導(dǎo)的線粒
4、體損傷在NAFLD進(jìn)展中的作用以及姜黃素對(duì)NAFLD的保護(hù)作用。 方法和結(jié)果: ⑴用高脂飲食誘導(dǎo)新西蘭家兔2、4、6、8、10、12周,收集肝臟、升主動(dòng)脈、胰腺、心肌標(biāo)本行病理檢查。發(fā)現(xiàn)高脂飲食誘導(dǎo)下NAFLD的發(fā)生早于動(dòng)脈粥樣硬化,胰腺和心肌在光鏡下未見病理改變。 ⑵我們通過CD(choline deficiency diet,CD)飲食誘導(dǎo)建立NAFLD不同階段疾病模型,檢測(cè)肝臟勻漿的TBARS(Thioba
5、rbituric Acid Reactive Substances,TBARS)、還原性谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)、超氧物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)活力。發(fā)現(xiàn)隨著CD飲食誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)肝臟脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物TBARS逐漸升高,而肝臟的非酶抗氧化物GSH卻逐漸衰竭,抗氧化酶活力逐漸下降
6、。說明肝臟脂肪沉積能引起活性自由基累積和氧化損傷。 ⑶用不同比例的軟脂酸和油酸混合液誘導(dǎo)HL-7702(L02)細(xì)胞,通過檢測(cè)細(xì)胞活力和細(xì)胞凋亡比例,研究不同的脂肪酸對(duì)細(xì)胞的影響。發(fā)現(xiàn)①當(dāng)兩者以2:1比例混合誘導(dǎo)L02細(xì)胞時(shí),細(xì)胞的TG沉積較對(duì)照組顯著增加,對(duì)細(xì)胞的損傷作用最低,成功建立了NAFLD‘一次’打擊模型。②軟脂酸和油酸對(duì)L02細(xì)胞有不同的損傷作用,軟脂酸主要是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和壞死,引起細(xì)胞內(nèi)TG沉積的作用微弱。油酸誘導(dǎo)
7、L02細(xì)胞TG(triglyceride,TG)沉積的作用較為明顯,而對(duì)細(xì)胞的致凋亡和壞死的作用微弱。③FFA的細(xì)胞毒力有誘導(dǎo)時(shí)間、脂肪酸飽和度、濃度依賴性。 ⑷給予1.0mM/L的OP21液(油酸:軟脂酸=2:1)誘導(dǎo)L02細(xì)胞24、48小時(shí)之后,再給予不同濃度的雙氧水刺激5小時(shí),檢測(cè)細(xì)胞凋亡和壞死的發(fā)生比例。利用外源性ROS刺激脂肪變L02細(xì)胞成功建立了NAFLD‘二次打擊’模型。發(fā)現(xiàn)細(xì)胞脂肪變性越嚴(yán)重,對(duì)外源性ROS打擊越
8、敏感。 ⑸用1mM/L的雙氧水孵育24、48小時(shí)脂肪變的L02細(xì)胞5小時(shí),檢測(cè)細(xì)胞凋亡、capase-3活力、ROS水平以及線粒體勢(shì)能。發(fā)現(xiàn)脂肪酸和雙氧水均能引起L02細(xì)胞線粒體勢(shì)能崩潰、ROS生成上調(diào);脂肪變L02細(xì)胞對(duì)外源性ROS的敏感性升高,并與病變嚴(yán)重程度正相關(guān)。 ⑹用OP21液(油酸:軟脂酸=2:1)誘導(dǎo)L02細(xì)胞24、48、72小時(shí),檢測(cè)細(xì)胞MDA(malondialdehyde,丙二醛)、GSH、SOD活力
9、、CAT活力。發(fā)現(xiàn)隨著FFA誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞GSH逐漸耗竭,SOD活力,CAT活力逐漸下降;脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(MDA)逐漸升高;線粒體勢(shì)能逐漸降低、ROS逐漸升高。說明FFA引起細(xì)胞氧化還原系統(tǒng)失衡,細(xì)胞存在氧化應(yīng)激。 ⑺用5、12.5、25uM/L的姜黃素干預(yù)脂肪變細(xì)胞24、48小時(shí),給予雙氧水刺激5小時(shí),檢測(cè)細(xì)胞凋亡和caspase-3活力。發(fā)現(xiàn)高濃度的姜黃素能誘導(dǎo)L02細(xì)胞發(fā)生凋亡,ROS能加重L02細(xì)胞對(duì)姜黃素誘導(dǎo)凋亡
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 線粒體損傷在支氣管哮喘發(fā)生機(jī)制中的作用.pdf
- 姜黃素對(duì)脾放射損傷的影響及其機(jī)制研究.pdf
- Nrf2在液壓沖擊腦損傷抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用以及姜黃素對(duì)其的影響.pdf
- 線粒體損傷在NAFL大鼠肝細(xì)胞凋亡中的作用.pdf
- 姜黃素對(duì)損傷內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf
- Nrf2對(duì)液壓沖擊腦損傷炎性細(xì)胞因子表達(dá)的調(diào)控作用以及姜黃素對(duì)其的影響.pdf
- 姜黃素對(duì)鎘致心臟損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 線粒體損傷在α粒子致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用.pdf
- 姜黃素對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)大鼠腎損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf
- 姜黃素對(duì)酒精誘導(dǎo)的肝細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf
- 環(huán)境雌激素MEHP通過ROS介導(dǎo)的線粒體損傷在TRALI中的作用機(jī)制研究.pdf
- 姜黃素對(duì)高氧誘導(dǎo)AECII損傷的保護(hù)作用.pdf
- 線粒體損傷在重癥休克中作用及虎杖苷治療.pdf
- 姜黃素對(duì)慢性酒精肝損傷保護(hù)作用的研究.pdf
- 姜黃素對(duì)MPTP所致多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf
- 姜黃素對(duì)UUO大鼠腎臟保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf
- 姜黃素對(duì)高脂血癥大鼠的調(diào)脂作用及機(jī)制.pdf
- 姜黃素對(duì)泡沫細(xì)胞形成的影響及機(jī)制
- 姜黃素激活Nrf2系統(tǒng)緩解線粒體損傷和胰島素抵抗作用機(jī)制研究.pdf
- 姜黃素對(duì)慢性低氧下肺血管重塑的影響及作用機(jī)制.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論