野桑蠶的有機磷抗性調(diào)查及抗性基因GST-Omega1的融合表達研究.pdf

1、野桑蠶(Bombyx mandarina)屬鱗翅目蠶蛾科，和經(jīng)濟昆蟲家蠶(Bombyx mori)具有共同的祖先，現(xiàn)在普遍認(rèn)為野桑蠶的農(nóng)藥抗性大于人工訓(xùn)化過的家蠶，國內(nèi)外不少學(xué)者對家蠶的農(nóng)藥抗性進行了較多的研究，但對野桑蠶的研究較少，篩選出野桑蠶的抗性品種至今未見報道。 本研究以篩選有機磷抗性野桑蠶品種為目的，探討野桑蠶對有機磷農(nóng)藥的抗性。我們從野外收集野桑蠶，通過添食不同濃度的敵敵畏農(nóng)藥，進行逐代篩選。結(jié)果顯示：在有機磷農(nóng)藥的

2、壓力選擇下，野桑蠶對敵敵畏農(nóng)藥的抗性逐代加強，敏感性逐代降低，經(jīng)過三個世代的篩選，野桑蠶對敵敵畏的最高抗性水平提高1倍，各代的化蛹率也相應(yīng)提高。初步篩選出的抗性野桑蠶品種為野桑蠶抗性基因的研究提供了較好的材料，同時為鱗翅目害蟲的防治和抗性家蠶品種的選育提供了一定的理論數(shù)據(jù)。 谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferases，GSTs)是昆蟲體內(nèi)的一類與抗性相關(guān)的初級代謝及次級代謝酶系，該酶系參與有機磷、有

3、機氯和植物次生物質(zhì)的解毒。 本研究通過RT-PCR從野桑蠶中腸組織細(xì)胞中獲得GST-Omegal基因的cDNA序列，該基因的ORF為771 bp，編碼256 aa；對推導(dǎo)的氨基酸序列用NCBI的蛋白質(zhì)Conserv-edDomains工具進行在線分析，結(jié)果顯示：GST-Omegal的氨基酸序列中具有Cys<'38>和8個GSH結(jié)合位點的Omega類基因保守序列；對所獲得的GST-Omegal基因在大腸桿菌表達系統(tǒng)進行表達，經(jīng)SD

4、S-PAGE和Westem-blot--ring分析，都能檢測到一條分子量約為33 kD的特異性條帶，與推導(dǎo)的融合蛋白大小相符，該目的蛋白的表達量占總蛋白的20．6％。進一步將該基因在Bac-to-Bac系統(tǒng)進行表達，表達的33 kD蛋白，與推導(dǎo)的融合蛋白大小相符，該目的蛋白的表達量占總蛋白的14．4％；將Bac-to-Bac系統(tǒng)中表達的融合蛋白經(jīng)His·Bind樹脂純化，以CDNB為底物測定其酶比活性為0．09μmol/(mg·min