蘋果梨雜交后代單株的RAPD分析.pdf

1、本研究以紅金秋、延光梨等6個梨屬及紅金秋×蘋果梨(論文中將供試用的紅金秋×蘋果梨雜交單株21株簡稱為1號～21號)的F<,1>代雜種群體21株為試材，應(yīng)用RAPD技術(shù)，對其進行了品種鑒定和分類地位的研究。結(jié)果表明： 采用改良CTAB法在提取部分梨基因組DNA過程中表現(xiàn)最好且純度最高：SDS-CTAB法存在大量的降解片段，DNA的獲得率不高；經(jīng)顯著性方差分析，采用改良SDS法提取的各梨品種DNA產(chǎn)率均顯著優(yōu)于其他方法，但純度較低：

2、高鹽低pH值法產(chǎn)率和純度均最低且完整性均不理想。本實驗最終采用CTAB改良法快速提取到了較高質(zhì)量蘋果梨雜交后代基因組總DNA用于RAPD擴增，并在RAPD反應(yīng)中篩選出17個10堿基隨機引物，它們的多態(tài)性百分率大多在76.07％以上。確定了RAPD-PCR蘋果梨雜交后代最適反應(yīng)體系為：總反應(yīng)體系為25ul，其中模板DNA濃度為135ng/μl，引物濃度為15pmol，dNTP濃度為1.5mmol/L，Mg<'2+>濃度為1.5mmol/L

3、及Taq DNA聚合酶濃度為1.0 u，其余用重蒸餾水補充。擴增程序為：預(yù)變性94℃5min，變性94℃1min，退火溫度40℃1min，延伸72℃1.5min，共40個循環(huán)：72℃最終延伸5min。 建立了27個樣品的指紋圖譜。找到了4個樣品的特征標(biāo)記。27個樣品中的20個樣品可以用一個引物的兩條帶和其它樣品區(qū)分開。 對供試蘋果梨雜交后代及其相關(guān)品種27株進行了RAPD擴增，根據(jù)遺傳距離進行了聚類分析，以遺傳距離0.3

4、0為結(jié)合線，將供試樣品分成了5類。27個樣品的遺傳距離范圍在0.10～0.46之間，以遺傳距離0.30為結(jié)合線，將供試樣品分成了5類：第一類全部是蘋果梨雜交后代，包括：紅×蘋2號、3號、5～21號，共19個單株；第二類包括紅金秋、紅×蘋1號、4號、蘋果梨，說明紅×蘋l號和4號與蘋果梨親緣關(guān)系最近，繼承蘋果梨的基因較多，其他雜交后代繼承紅金秋的基因較多；紅金秋是大香水和蘋果梨的雜交后代，從圖11中看出紅金秋與蘋果梨關(guān)系較近，說明紅金秋本身