更年安湯對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠自由基水平及卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、　　目的
　　觀察更年安湯對(duì)圍絕經(jīng)期雌性大鼠的影響。本課題通過放免法測(cè)定模型大鼠血清雌二醇( E2)含量,比色法檢測(cè)超氧化物歧化酶( SOD)與丙二醛( MDA)含量,免疫印跡法( Western blotting)檢測(cè)各組大鼠卵巢顆粒細(xì)胞中 Bax 及 bcl-2 蛋白的陽性表達(dá),以及光學(xué)顯微鏡觀察卵巢組織形態(tài)學(xué)變化,從而探討更年安湯對(duì)圍絕經(jīng)期雌性大鼠的治療作用,以及雌激素含量與圍絕經(jīng)期氧自由基代謝和顆粒細(xì)胞凋亡的相關(guān)性。探討

2、該方通過改善圍絕經(jīng)期抗氧化作用及減少細(xì)胞凋亡從而達(dá)到延緩衰老,改善衰老卵巢功能的機(jī)制,為中醫(yī)中藥治療圍絕經(jīng)期綜合征提供相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法
　　12 月齡 SD 雌性大鼠 50 只,3 月齡 SD 雌性青年大鼠 10 只。按照自然老化初老動(dòng)物模型要求,對(duì) 12 月齡雌性大鼠進(jìn)行連續(xù) 10 天陰道細(xì)胞學(xué)涂片檢查,選取動(dòng)情周期不規(guī)則、動(dòng)情間期延長(zhǎng)者為圍絕經(jīng)期大鼠模型。將陰道涂片提示自然圍絕經(jīng)期造模成功的 40 只大

3、鼠隨機(jī)分為 4 組,分別為老年模型組(模型組)、己烯雌酚組(己烯組)、更年安湯高劑量組(安高組)、更年安湯低劑量組(安低組),另將 3 月齡 SD 雌性青年大鼠 10 只作為青年對(duì)照組(青年組)。青年組和模型組給予等體積生理鹽水20ml·kg-1·d-1灌胃,己烯組給予 0.08mg·kg-1·d-1灌胃,更年安湯高、低劑量組分別給予生藥量 47.2g·kg-1·d-1、23.6g·kg-1·d-1灌胃,每周稱重 1 次,從造模成功第

4、1 日起開始給藥,每日灌胃 2 次,連續(xù) 28 天。最后 1 次灌胃禁食 24h 后,立即斷頭處死各組大鼠取血,并剖取大鼠卵巢,放免法檢測(cè)各組大鼠血清 E2 及比色法檢測(cè)超氧化物歧化酶( SOD)與丙二醛( MDA)含量,免疫印跡法( Western blotting)檢測(cè)各組大鼠卵巢顆粒細(xì)胞中 Bax 及 bcl-2 蛋白的陽性表達(dá),以及光學(xué)顯微鏡觀察卵巢組織形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果
　　1 更年安湯對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠血清

5、E2 的影響：與模型組相比,青年組及三個(gè)治療組大鼠血清 E2含量均較高( P<0.01)。
　　2 更年安湯對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠血清 SOD 和 MDA 的影響：與青年組相比,模型組大鼠 SOD 活性明顯下降,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與模型組相比,更年安湯高劑量組和己烯雌酚組活性明顯升高,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),更年安湯高、低劑量組與己烯雌酚組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與青年組相比,模型組大鼠

6、 MDA 含量明顯升高,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比,更年安湯高劑量組 MDA 含量明顯下降,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與己烯雌酚組相比,更年安湯高劑量組 MDA 含量明顯下降,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；更年安湯低劑量組與己烯雌酚組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3 更年安湯對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠卵巢 Bax蛋白和 bcl-2蛋白表達(dá)的影響：與模型組相比,青年組和三個(gè)治療組卵巢

7、 Bax蛋白表達(dá)均較低( P<0.05),更年安湯高低組與己烯組卵巢 Bax 蛋白表達(dá)雖均有降低,但仍高于青年組( P<0.05)；與模型組相比,青年組和三個(gè)治療組卵巢 bcl-2 蛋白表達(dá)均較高( P<0.05),更年安湯高低組與己烯組卵巢 bcl-2 蛋白表達(dá)雖均有提高,但仍低于青年組( P<0.05)。
　　4 更年安湯對(duì)圍絕經(jīng)期雌性大鼠卵巢形態(tài)學(xué)的影響：青年組卵巢內(nèi)可各級(jí)生長(zhǎng)卵泡數(shù)量較多,顆粒層較厚,黃體數(shù)量較多；老年組