Wnt3a蛋白調(diào)控大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化的研究.pdf

1、目的：Wnt信號通路是近年發(fā)現(xiàn)的對于細胞生物學行為具有重要調(diào)節(jié)作用的一個新的研究熱點。現(xiàn)有研究表明無論是經(jīng)典的Wnt/β-catenin/TCF(LEF1)通路，還是非經(jīng)典的Wnt通路對于具有多向分化潛能的間充質(zhì)干細胞的骨發(fā)生都具有重要的調(diào)節(jié)作用。本研究在于探索經(jīng)典Wnt/β-catenin/TCF(LEF1)通路對大鼠骨髓來源的間充質(zhì)干細胞在體外成骨分化中的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：新生SD大白鼠6只，由華中科技大學同濟醫(yī)院試驗

2、動物中心提供，用于制備骨髓間充質(zhì)干細胞。Wnt3a蛋白為PeproTech公司產(chǎn)品。細胞學體外對照觀察：采用全骨髓體外分離法培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，選取傳至第3 代的骨髓間充質(zhì)干細胞，按5×107 L-1接種后各分為3組，分別加入含108 mol/L的地塞米松、10 mol/Lβ-甘油磷酸鹽、50 mg/L維生素C的DMEM成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基2.0 mL。A組在誘導(dǎo)分化后的第8天起加入濃度10mg/LWnt3a，連續(xù)3天；B組在誘導(dǎo)分化后的第

3、18天起加入濃度10mg/LWnt3a，連續(xù)3天。C組為對照組，在分化的全過程不加入Wnt3a蛋白。主要觀察指標：倒置顯微鏡觀察間充質(zhì)干細胞生長和增殖情況，流式細胞儀檢測間充質(zhì)干細胞表面標志物的表達，堿性磷酸酶染色檢測向成骨細胞分化情況，堿性磷酸酶定量分析結(jié)果。
　　 結(jié)果：第3代骨髓間充質(zhì)干細胞的惡CD44陽性率為94.88％，CD90的陽性率為94.37％，CD45為0.95％。加入成骨誘導(dǎo)劑后7d，經(jīng)誘導(dǎo)的骨髓基質(zhì)干細胞呈

4、堿性磷酸酶陽性。在第11天，檢測A組的堿性磷酸酶的活性較B、C組高（P＜0.01）。第21日，檢測B組的堿性磷酸酶活性較C組低（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：大鼠骨髓來源間充質(zhì)干細胞體的外成骨性能受Wnt3a信號通路調(diào)節(jié)，并且這種調(diào)節(jié)依賴于被作用細胞的分化階段的，在間充質(zhì)干細胞進入分化期后，Wnt3a所介導(dǎo)的經(jīng)典Wnt信號通路對于間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化具有促進作用，但當?shù)匠晒羌毎l(fā)育成熟的晚期，Wnt3a介導(dǎo)的經(jīng)典Wnt信號