白細(xì)胞介素17D(IL-17D)在惡性腫瘤進(jìn)展中作用的研究.pdf

1、目的:惡性腫瘤是一類由于控制細(xì)胞增殖機(jī)制失常而引起的疾病。根據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的數(shù)據(jù)顯示，2012年全球約有820萬(wàn)人死于惡性腫瘤，其中中國(guó)因惡性腫瘤死亡的人數(shù)占全世界的26.9％。目前我國(guó)居民惡性腫瘤的發(fā)病率為285.91/10萬(wàn)，因惡性腫瘤導(dǎo)致的死亡占總數(shù)的13％。進(jìn)展迅速是惡性腫瘤的生物學(xué)特征之一，而惡性腫瘤在體內(nèi)的進(jìn)展速度受到多種因素的影響。其中，人體的固有免疫系統(tǒng)是影響惡性腫瘤進(jìn)展的重要因素。固有免疫系統(tǒng)可能在腫瘤進(jìn)展的過程中

2、起到雙向作用，即固有免疫系統(tǒng)中的特定細(xì)胞類型可能對(duì)惡性腫瘤的進(jìn)展起到抑制作用，而某些細(xì)胞類型則相反地促進(jìn)惡性腫瘤的進(jìn)展。早期的研究顯示白細(xì)胞介素(白介素、Interleukin、IL)是一組表達(dá)在白細(xì)胞中的細(xì)胞因子，但近年來的研究發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素可以表達(dá)于各種類型的細(xì)胞。白介素可以通過刺激免疫細(xì)胞增殖、分化，在局部募集特定類型的免疫細(xì)胞，或通過刺激或抑制免疫細(xì)胞生成某些細(xì)胞因子達(dá)成調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能的作用。在一項(xiàng)最近的研究中，IL-17D被

3、證實(shí)可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、IL-8及GM-CSF等一系列免疫系統(tǒng)相關(guān)的細(xì)胞因子，顯示出通過固有免疫系統(tǒng)調(diào)控惡性腫瘤進(jìn)展的潛力。本研究旨在研究在特異性免疫缺失的情況下，IL-17D是否可以通過調(diào)控固有免疫反應(yīng)影響惡性腫瘤在體內(nèi)的進(jìn)展，并進(jìn)一步探討其調(diào)控固有免疫反應(yīng)的機(jī)制，從而明確IL-17D對(duì)惡性腫瘤進(jìn)展的影響，并為惡性腫瘤的免疫治療提供理論依據(jù)。
　　方法:本研究采取病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的方法，以HTB-77、HTB-161兩種卵

4、巢癌細(xì)胞系為母本，制作了HTB-77（IL-17D）、HTB-161(IL-17D)2種IL-17D高表達(dá)細(xì)胞系及HTB-77(Ctrl)、HTB-161(Ctrl)2種IL-17D正常表達(dá)的對(duì)照組細(xì)胞系。使用細(xì)胞體外培養(yǎng)及免疫缺陷小鼠模型兩種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，探討了IL-17D與腫瘤細(xì)胞增殖及腫瘤在體內(nèi)進(jìn)展的關(guān)系。并進(jìn)一步使用流式細(xì)胞學(xué)方法分析小鼠體內(nèi)的腫瘤組織中各種免疫細(xì)胞亞型所占總體免疫細(xì)胞的比例，旨在分析IL-17D影響惡性腫瘤進(jìn)展的可

5、能機(jī)制。
　　本實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用了SPSS13.0軟件。對(duì)接種了不同數(shù)量及類型卵巢癌細(xì)胞小鼠的無瘤生存時(shí)間采用方差分析的檢驗(yàn)方法，比較不同水平的IL-17D表達(dá)是否影響腫瘤在小鼠體內(nèi)的進(jìn)展速度。采用t檢驗(yàn)，比較了IL-17D高表達(dá)腫瘤組織及IL-17D正常表達(dá)腫瘤組織中免疫細(xì)胞(CD45+)、M1/M2型巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、N1/N2型中性粒細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞募集比例的差異。以P＜0.05作為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)

6、果:
　　1轉(zhuǎn)染攜帶IL-17D基因病毒的HTB-77(IL-17D)及HTB-161(IL-17D)細(xì)胞中IL-17D表達(dá)顯著高于原始HTB-77及HTB-161細(xì)胞，轉(zhuǎn)染攜帶空白對(duì)照基因病毒的HTB-77（Ctrl）及HTB-161(Ctrl)中IL-17D表達(dá)與原始HTB-77及HB-161相比無顯著差異。
　　2體外細(xì)胞培養(yǎng)顯示，IL-17D表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞在體外增殖速度無顯著影響。
　　3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，IL-

7、17D高表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞在特異性免疫缺失的小鼠體內(nèi)進(jìn)展速度明顯高于IL-17D正常表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞。
　　4流式細(xì)胞學(xué)分析顯示，IL-17D高表達(dá)卵巢癌組織中的免疫細(xì)胞(CD45+)占總體細(xì)胞比例與對(duì)照組卵巢癌組織無顯著差異，M1型巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞占總體免疫細(xì)胞的比例顯著低于對(duì)照組，中性粒細(xì)胞（包括N1/N2型中性粒細(xì)胞）占總體免疫細(xì)胞的比例顯著高于對(duì)照組。
　　結(jié)論:在特異性免疫缺失的條件下，IL-17D可以調(diào)控腫瘤組