SPARC和ITGB1基因在結(jié)直腸癌的表達(dá)及與臨床預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、結(jié)直腸癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一。近年來(lái)其發(fā)病率呈逐步上升趨勢(shì)，并以結(jié)腸癌發(fā)病率的增高尤為明顯，直腸癌的發(fā)病率則保持基本不變，因而在結(jié)直腸癌中，結(jié)腸癌與直腸癌的比例正在發(fā)生明顯的變化。在結(jié)直腸癌高發(fā)地區(qū)中，這一現(xiàn)象表現(xiàn)得尤為明顯。但就全國(guó)而言，至少目前我國(guó)直腸癌仍占整個(gè)結(jié)直腸癌的60％～70％。在結(jié)直腸癌低發(fā)地區(qū)如印度、塞內(nèi)加爾和東歐，直腸癌的發(fā)病率可高于結(jié)腸癌。在直腸癌中約有3/4的病變位于腹膜返折部位以下，這是我國(guó)直腸癌的一大特

2、點(diǎn)。一般直腸癌以男性多發(fā)，男性與女性發(fā)病率的比例為1.5∶1～2.0∶1。我國(guó)男女發(fā)病率的比例較為接近，為1.3∶1～1.4∶1。從全球范圍來(lái)看，結(jié)直腸癌是所有惡性腫瘤患者中第三位的發(fā)病原因。西方發(fā)達(dá)國(guó)家結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于發(fā)展中國(guó)家和經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)，但近幾年來(lái)我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率也出現(xiàn)明顯上升狀態(tài)。
　　 結(jié)直腸癌的預(yù)后受多方面的影響，但最重要的是根據(jù)腫瘤侵犯的范圍。按TNM分期采取合理的以外科手術(shù)為主的

3、綜合治療措施是目前主要的治療方案。目前直腸癌根治性切除術(shù)后5年生存率仍在50％左右，故單純外科手術(shù)治療不能令人滿意。為提高治愈率，獲得最佳的治療效果，早期診斷和治療仍然是提高生存率的關(guān)鍵。以手術(shù)為主，既要徹底切除，又能保存機(jī)體功能，提高生活質(zhì)量，降低手術(shù)病死率。手術(shù)中盡量做到不觸摸腫瘤所在腸段，以避免由于觸摸腫瘤而導(dǎo)致播散，由此可使5年生存率提高16％。在術(shù)前、術(shù)后進(jìn)行綜合治療，如輔助放療、化療、免疫治療，可進(jìn)一步消滅局部殘留癌灶或遠(yuǎn)處

4、微小轉(zhuǎn)移癌灶，進(jìn)一步提高生存率。
　　 目前臨床上對(duì)結(jié)直腸癌主要的治療方法是外科手術(shù)切除，但是，即使應(yīng)用術(shù)后輔助放化療，患者術(shù)后仍存在較高的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率，嚴(yán)重影響了病人的生存預(yù)后和病情恢復(fù)。如今，TNM分期系統(tǒng)是AJCC和UICC推薦的結(jié)直腸癌分類標(biāo)準(zhǔn)，是目前臨床上選擇治療策略的金標(biāo)準(zhǔn)，但目前TNM分期系統(tǒng)并不能有效指導(dǎo)相當(dāng)一部分人群術(shù)后個(gè)體化治療方案的選擇。TNM分期系統(tǒng)在指導(dǎo)治療方案選擇上仍存在無(wú)法識(shí)別會(huì)發(fā)生復(fù)發(fā)的早期患者

5、和對(duì)放化療不敏感患者的局限性。因此，了解腫瘤治療失敗的原因和尋找有效的指導(dǎo)預(yù)后的影響因子仍然是結(jié)直腸癌治療的主要目標(biāo)。盡管很多研究已經(jīng)證明一些預(yù)后相關(guān)的影響因子，比如K-ras、染色體突變和微衛(wèi)星不穩(wěn)定等，但是僅僅K-ras基因的突變已經(jīng)應(yīng)用到了臨床治療。因此，本課題的目的就是尋找有效的預(yù)后因子來(lái)指導(dǎo)結(jié)直腸癌病人的臨床治療和生存預(yù)后。
　　 SPARC（Secreted protein acidic and rich in cy

6、steine，SPARC）是一種在許多腫瘤中得到了廣泛研究的分泌型糖蛋白。它的主要作用是參與組織修復(fù)、傷口愈合、細(xì)胞遷移和細(xì)胞分化等。盡管SPARC表達(dá)于許多腫瘤中，但它在不同的腫瘤中具有不同的表達(dá)和功能。在膀胱癌、乳腺癌和食管癌中，表達(dá)增高的SPARC基因與腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌中，作為預(yù)后因子，它的功能有待于進(jìn)一步研究。因此，應(yīng)用組織芯片和免疫組化結(jié)合的方法，我們研究SPARC基因在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況，分析

7、它的表達(dá)與結(jié)直腸癌生存預(yù)后的關(guān)系，指導(dǎo)我們的臨床治療。
　　 SPARC在大部分惡性腫瘤中高表達(dá)，且與腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。其具體作用機(jī)制可以歸納為3個(gè)方面:(1)降解細(xì)胞外基質(zhì)。細(xì)胞外基質(zhì)的降解是腫瘤細(xì)胞發(fā)生遷移的關(guān)鍵步驟，SPARC通過(guò)誘導(dǎo)多種蛋白酶的合成來(lái)降解細(xì)胞外基質(zhì)，促使細(xì)胞的分離和分裂，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移;(2)抗黏附作用。細(xì)胞分離在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的過(guò)程中具有關(guān)鍵作用，它能促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移;(3)促進(jìn)血管生成。

8、新生血管是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的先決條件。研究表明，SPARC通過(guò)細(xì)胞表面蛋白結(jié)合相關(guān)受體，調(diào)節(jié)基因表達(dá)、細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的細(xì)胞增殖和內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。有相關(guān)學(xué)者應(yīng)用特異性細(xì)胞受體抑制劑抑制SPARC基因的表達(dá)證明，SPARC的抗黏附作用和促內(nèi)皮增殖作用是通過(guò)酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　 整合素β1（Integrinβ1，ITGB1，CD29）是整合素家族中的一個(gè)亞家族。整合素家族包括18種α和8種β亞單位，它們可

9、以組合成24種與細(xì)胞外基質(zhì)黏附相關(guān)的細(xì)胞因子。整合素可以通過(guò)FAK、Src和絲氨酸-蘇氨酸途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、增殖、侵襲和生存等功能。相關(guān)研究報(bào)道，ITGB1基因的表達(dá)在乳腺癌、肺癌和胰腺癌中是預(yù)后良好的影響因子，但是，它在結(jié)直腸癌中的作用及與臨床預(yù)后的關(guān)系卻缺乏有力的研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)擬根據(jù)結(jié)直腸癌病人臨床資料、術(shù)后復(fù)發(fā)和治療等信息資料進(jìn)行分組，并通過(guò)組織芯片技術(shù)將樣本高通量制片，然后通過(guò)免疫組化技術(shù)檢測(cè)SPARC和ITGB

10、1基因在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，并與結(jié)直腸癌患者的總體生存時(shí)間和無(wú)病生存時(shí)間進(jìn)行預(yù)后分析，希望找出SPARC和ITGB1基因與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系，指導(dǎo)結(jié)直腸癌患者的術(shù)后治療。
　　 結(jié)果顯示，SPARC在結(jié)直腸癌中呈現(xiàn)高表達(dá)，而在正常粘膜中則呈現(xiàn)低表達(dá)或不表達(dá)。SPARC的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤浸潤(rùn)深度和術(shù)后化療無(wú)明顯相關(guān)性，而SPARC的表達(dá)則與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、CEA和CA19-9存在明顯相關(guān)性。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示:

11、腫瘤浸潤(rùn)深度[hazard ratio(HR)，2.331;95％ confidence interval(CI)，1.153-4.711;P=0.018]、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR,2.059; CI,1.566-2.707; P＜0.001)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR,4.263; CI,2.672-6.802; P＜0.001)、CA19-9(HR,1.595; CI,1.019-2.498; P=0.041)和SPARC間質(zhì)表達(dá)(HR,0.654

12、; CI，0.409-1.048; P=0.028)是總體生存時(shí)間獨(dú)立的預(yù)后因素。對(duì)于無(wú)病生存時(shí)間，腫瘤浸潤(rùn)深度(HR,1.842; CI，1.012-3.350; P=0.045)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR,1.590; CI，1.270-1.991;P＜0.001)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR,2.917; CI，1.925-4.421;P＜0.001)和SPARC間質(zhì)表達(dá)(HR,0.536; CI,0.359-0.802; P=0.002)均是無(wú)病生

13、存時(shí)間獨(dú)立的預(yù)后因子。SPARC表達(dá)升高的病人相對(duì)于表達(dá)降低的病人具有更長(zhǎng)的總體生存時(shí)間和無(wú)病生存時(shí)間。
　　 ITGB1在正常粘膜、結(jié)腸息肉中基本處于不表達(dá)或低表達(dá)狀態(tài)，而在結(jié)直腸癌中則呈現(xiàn)高表達(dá)，并且隨著腫瘤TNM分期的升高，它在結(jié)直腸癌中的表達(dá)明顯升高。ITGB1與性別、年齡、腫瘤浸潤(rùn)深度、CEA和CA19-9無(wú)明顯相關(guān)性，而ITGB1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在明顯相關(guān)性，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯

14、示:腫瘤浸潤(rùn)深度(HR,2.126; CI，1.140-3.963;P=0.018)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR,1.900; CI，1.472-2.452; P＜0.001)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR,4.000; CI，2.517-6.357; P＜0.001)和ITGB1表達(dá)(HR,1.782; CI，1.365-2.328; P＜0.001)是總體生存時(shí)間獨(dú)立的預(yù)后因素。對(duì)于無(wú)病生存時(shí)間，腫瘤浸潤(rùn)深度(HR,1.726; CI，1.057-2.82

15、1;P=0.029)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR,1.696; CI，1.380-2.084; P＜0.001)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR,3.447; CI，2.310-5.143; P＜0.001)和ITGB1的表達(dá)(HR,1.707; CI，1.377-2.118; P＜0.001)均是無(wú)病生存時(shí)間的獨(dú)立的預(yù)后因素。而且，ITGB1表達(dá)升高的病人相對(duì)于表達(dá)降低的病人具有更短的總體生存時(shí)間和無(wú)病生存時(shí)間(P＜0.001)。
　　 本實(shí)驗(yàn)揭示SP