外源性一氧化碳釋放分子(CORM)2對膿毒癥中凝血系統(tǒng)血小板的(部分)調(diào)節(jié)作用及分子機制.pdf

1、膿毒癥(Sepsis)是嚴重創(chuàng)傷、休克及感染后常見的并發(fā)癥,進一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征(MODS),即便在基礎(chǔ)與臨床醫(yī)學研究及重癥監(jiān)護手段高度發(fā)展的現(xiàn)代,臨床治療仍然收效甚微,死亡率居高不下!分析表明,全世界10%的死亡患者與膿毒癥密切相關(guān)。由于膿毒癥的病理過程極其復(fù)雜,只有致力于闡明其確切的病理生理機制,尋找新的、有效的治療靶點,才有希望逐步解決目前臨床膿毒癥防治的重重困難。在膿毒癥復(fù)雜的發(fā)病機制中,凝血系統(tǒng)紊亂

2、是死亡率增加的一個重要原因。膿毒癥是炎癥反應(yīng)和凝血活化的重要刺激因素,凝血活化和炎癥反應(yīng)之間存在明顯的交叉反應(yīng)。炎癥通過誘導(dǎo)組織因子(TF)和血管內(nèi)皮細胞表面白細胞黏附分子的表達,減少纖維蛋白溶解,抑制抗凝系統(tǒng)促進凝血;凝血酶又可刺激炎癥反應(yīng)發(fā)生。現(xiàn)在認為膿毒癥早期以TNF-a增高、凝血和纖溶激活為特征。膿毒癥時產(chǎn)生的多種促炎癥因子如TNF-a、IL-1及IL-6等可引起并加重高凝。細胞因子增高后可見凝血酶生成的標志物和纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)?/p>

3、纖維蛋白的標志物顯著升高,提示凝血酶生成增加,凝血系統(tǒng)經(jīng)細胞因子介導(dǎo)而活化。反之,凝血酶、因子Xa、纖維蛋白等凝血因子又可通過刺激單核細胞、內(nèi)皮細胞釋放TNF-a、IL-1及IL-6等促進炎癥反應(yīng)發(fā)生。因此,凝血活化與細胞因子形成相互促進的循環(huán),在研究膿毒癥的病理生理及治療時,必須高度重視凝血系統(tǒng)紊亂問題和抗凝策略。另外血小板活化、聚集形成病理性血栓,這在炎癥和凝血之間復(fù)雜的相互作用中間也占據(jù)著非常重要的中間位置[1、2]。
　　

4、 內(nèi)源性一氧化碳(carbonmonoxide,CO)是人體內(nèi)由血紅素加氧酶(HO)催化血紅素產(chǎn)生的重要的化學氣體信使之一。大量的實驗結(jié)果表明,CO在機體內(nèi)發(fā)揮著重要的抗炎、細胞保護、抗凋亡等生理作用,并參與了膿毒癥引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)、內(nèi)毒素性休克、缺血再灌注損傷等病理生理過程。我們前期研究也發(fā)現(xiàn)CO可以有效地緩解急性炎癥反應(yīng),表現(xiàn)出重要的抗炎效用和細胞保護作用,但其機制尚未完全明確。
　　 近年來,一氧化碳釋放分子(tric

5、arbonyldichlororutheniumⅡdimer,CORM-2)是一種新合成的新型金屬羰基化合物,被證實可以在機體內(nèi)緩慢釋放CO,具有擴張主動脈、降低心肌缺血再灌注損傷等作用,有潛在的藥用價值。而目前,有關(guān)外源性CO對膿毒癥高凝狀態(tài)的影響的相關(guān)研究還比較少見。本實驗室已有研究表明,外源性CO在一定程度上抑制了膿毒癥小鼠凝血系統(tǒng)的活化。在膿毒癥早期,可以通過拮抗血小板的異?；罨涂鼓齺磉M行治療。為此,在本研究中,我們通過建立人

6、靜脈血CLP膿毒癥模型,并用CORM-2進行干預(yù),行離體實驗研究。旨在探討外源性CO是否對膿毒癥早期高凝狀態(tài)具有抑制作用,并探討CO可能的作用機制。
　　 第一部分，外源性一氧化碳釋放分子(CORM)2對體外人血小板膜糖蛋白及血小板功能的調(diào)節(jié)作用
　　 目的：探討CORM-2干預(yù)下人血小板膜糖蛋白及血小板功能指標的變化。
　　 方法：以LPS孵育人靜脈血,刺激血小板活化,再予以CORM-2干預(yù)。用流式細胞儀分析P

7、RP中血小板膜糖蛋白CD61、CD62p水平,以檢測LPS刺激時血小板活化程度和CORM-2干預(yù)結(jié)果;最后取抗凝血,用玻球法分析血小板粘附率,用血小板聚集儀分析血小板聚集功能的變化,并制出聚集率曲線圖,從功能上分析CORM-2對血小板的作用。
　　 結(jié)果：CORM-2可以降低LPS孵育后血漿中血小板膜糖蛋白CD61、CD62p的表達,對活化后血小板粘附和聚集功能的亢進也有明顯的抑制作用。
　　 結(jié)論：從血小板活化及其功能

8、指標的檢測上顯示了CORM-2可以在一定程度上抑制LPS刺激時凝血系統(tǒng)的活化,為膿毒癥的治療擴展了新思路。
　　 第二部分，外源性一氧化碳釋放分子(CORM)2對LPS刺激人血小板肌動蛋白聚合的影響
　　 目的：探討CORM-2干預(yù)下人血小板肌動蛋白聚合的變化。
　　 方法：取健康成人血小板以LPS誘導(dǎo)激活,分別用iCORM-2、不同劑量CORM-2處理,采用Triton抽提液提取后SDS-PAGE分離出肌動蛋白