桃小食心蟲病原真菌的致病性及其胞外酶的作用研究.pdf

1、桃小食心蟲是我國北方地區(qū)危害最大的一種果樹食心蟲類害蟲。以往的化學(xué)殺蟲劑防治對具有入土和蛀果危害習(xí)性的桃小食心蟲幼蟲起不到防治效果，利用昆蟲病原真菌感染致死昆蟲成為桃小食心蟲防治新技術(shù)研究的重要領(lǐng)域。為了篩選對桃小食心蟲具有高毒力的菌株，本文從自然染病的桃小食心蟲蟲體上分離出致病菌，進行劃線分離、形態(tài)鑒定、致病力比較和侵染特性的研究，為桃小食心蟲的生物防治篩選出高毒力病原菌株，并對真菌的應(yīng)用提供理論依據(jù)。內(nèi)容包括(1)桃小食心蟲自然染病

2、蟲尸上病原真菌的分離及形態(tài)鑒定;(2)病原菌株致病力和對北方低溫低濕環(huán)境適應(yīng)性比較;(3)病原菌侵染桃小食心蟲過程中胞外酶和海藻糖酶的作用。結(jié)果如下:
　　(1)從自然染病桃小食心蟲蟲尸上分離出5株真菌，分別編號為TSL01、TSL02、TSL03、TSL04和TST05，通過回接試驗證明這5株菌株為桃小食心蟲的病原菌。其培養(yǎng)性狀和顯微形態(tài)特征如下:菌株TSL01、TSL03和TSL04均為白色菌絲，菌落較大，菌絲較稀疏，分生孢子

3、既有大孢子又有小孢子，大孢子月牙形或鐮刀形，具有隔，小孢子腎形、卵圓形或橢圓形，單生或假頭狀著生，菌絲透明有隔，輪狀生長;菌株TSL02菌落小，后期產(chǎn)生黃色色素，分生孢子圓柱形至梭形，串生，分生孢子梗呈“Y”形;菌株TST05菌落較小，菌絲初期為白色，后期為黃色，產(chǎn)生濃密的黃色孢子粉，分生孢子球形，以球形的分生孢子頭形成孢子，分生孢子梗成筒形。據(jù)此鑒定菌株TSL01、TSL03和TSL04屬于鐮孢屬尖孢鐮孢菌（Fusariumoxysp

4、orum），菌株TSL02屬于擬青霉屬粉質(zhì)擬青霉（Paecilomyces farinosus），菌株TST05為白僵菌屬球孢白僵菌（Beauveria bassiana）。其中尖孢鐮孢菌和粉質(zhì)擬青霉是寄生桃小食心蟲新的病原菌種。
　　(2)測定了5株真菌(球孢白僵菌BbTST05，粉質(zhì)擬青霉PfTSL02，尖孢鐮孢菌FoTSL01，F(xiàn)oTSL03，F(xiàn)oTSL04)對寄主的感染致死率、產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率、抗紫外線能力、胞外類枯草桿

5、菌蛋白酶、幾丁質(zhì)酶和脂肪酶的活性，比較了生物學(xué)特性和致病力。結(jié)果顯示，球孢白僵菌BbTST05和粉質(zhì)擬青霉PfTSL02對桃小食心蟲致死率最高，在10d內(nèi)桃小食心蟲死亡率分別為89.28％和72.22％，LT50最小，分別為5.49d和7.09d;兩菌株在各個溫、濕度條件下產(chǎn)孢量和萌發(fā)率也最高，產(chǎn)孢量比尖孢鐮孢菌3個菌株的高6-11倍，萌發(fā)率達(dá)到93％以上;在15℃和RH30％的低溫低濕條件下，二菌株的產(chǎn)孢量和萌發(fā)率仍很高，其中BbTS

6、T05產(chǎn)孢量為1.93×108個/cm2，PfTSL02的為1.63×108個/cm2，兩菌株的孢子萌發(fā)率都達(dá)到30％以上;兩菌株的菌落生長受紫外線照射的影響非常小，說明它們抗紫外線能力強。為了評價這5個菌株的致病力，本研究比較了它們分泌胞外酶的能力。在5個菌株中，菌株BbTST05的類枯草桿菌蛋白酶、幾丁質(zhì)酶和脂肪酶活性最大，活性高峰也出現(xiàn)的最早，菌株P(guān)fTSL02的3種胞外酶活性僅次于BbTST05菌株。類枯草桿菌蛋白酶、幾丁質(zhì)酶和

7、脂肪酶的活性與桃小食心蟲死亡率呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9213，0.8922，0.8016。本研究為桃小食心蟲生物防治篩選了兩個高效致病菌株，即球孢白僵菌和粉質(zhì)擬青霉。
　　(3)球孢白僵菌BbTST05菌株接種到桃小食心蟲表皮培養(yǎng)基上，結(jié)果發(fā)現(xiàn)類枯草桿菌蛋白酶在前3d酶活性持續(xù)增長并處于較高水平，在第3d達(dá)到最大值12.43±0.69U/g，然后開始下降;幾丁質(zhì)酶活性在前3d快速增長，3d后增長放緩，持續(xù)上升到第8d達(dá)到

8、最大值1.467±0.108U/g。說明類枯草桿菌蛋白酶在菌絲侵染表皮的前期發(fā)揮了作用，降解表皮中的蛋白質(zhì)，使幾丁質(zhì)暴露，誘導(dǎo)幾丁質(zhì)酶的產(chǎn)生以分解表皮的幾丁質(zhì)。脂肪酶活性在前6d持續(xù)上升，達(dá)到最大值2.654±0.163U/g,然后降低。說明脂肪酶在菌絲入侵蟲體體壁的前期對蠟層的分解能力持續(xù)上升，在后期作用較小。球孢白僵菌BbTST05接種到桃小食心蟲蟲體培養(yǎng)基上連續(xù)培養(yǎng)6d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蟲體的海藻糖含量隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加逐漸減少，前3d的