牛膝化學成分及質(zhì)量評價方法研究.pdf

1、　　目的：牛膝為莧科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的干燥根，是中國藥典2010版收載品種，其性平，味甘苦酸，具有逐瘀通經(jīng)，補肝腎，強筋骨，利尿通淋，引血下行等功效。用于經(jīng)閉，痛經(jīng)，腰膝酸痛，筋骨無力，淋證，水腫，頭痛，眩暈，牙痛，口瘡，吐血等功效。牛膝作為常用大宗藥材品種，臨床應用廣泛，主產(chǎn)于河南溫縣、武陟、博愛等地區(qū)(即古懷慶府)，河北、安徽、山東、內(nèi)蒙等地也有種植。懷牛膝是河南主產(chǎn)的道地藥材品種 ―四大懷

2、藥 ‖之一。牛膝的主要化學成分有多糖類、皂苷類、甾酮類、三萜皂苷、生物堿類和香豆素類化合物，具有抗生育、鎮(zhèn)痛、消炎、抗菌、增強人體免疫力、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、活血、降血糖、利尿等多種藥理作用。研究表明，牛膝中的蛻皮甾酮有抑制破骨細胞分化、促成骨樣細胞增殖活性，促進蛋白質(zhì)合成的作用。牛膝中的三萜皂苷類成分具有保肝利膽、降血脂、強心等作用 ， 能明顯降低血清中甘油三酯、膽固醇和脂蛋白的含量。因此其具有巨大的研究價值，在醫(yī)藥保健、農(nóng)藥、化

3、妝品等方面可廣泛的應用，發(fā)揮巨大的應用價值。同時，懷牛膝又是重要的出口藥材品種。為了適應中藥材質(zhì)量可控的要求，深入開發(fā)利用道地藥材資源。本課題依托河南省重點科技攻關計劃項目 ―四大懷藥的道地性和質(zhì)量評價方法研究 ‖對牛膝進行化學成分和質(zhì)量評價研究。本實驗用道地產(chǎn)區(qū)溫縣、武陟等地和河北、安徽、山東等地牛膝藥材，進行牛膝化學成分的研究，增加牛膝質(zhì)量評價指標，建立牛膝的質(zhì)量評價方法，這將有益于更科學有效的控制牛膝藥材及含牛膝復方制劑的質(zhì)量，確

4、保臨床用藥的安全性、有效性。
　　方法：本實驗主要分為如下三個部分： (1) 牛膝皂苷類化學成分的研究：根據(jù)牛膝皂苷類化學成分的理化性質(zhì)，用乙醇對牛膝進行提取，利用大孔吸附樹脂富集，得到的浸膏用硅膠柱層析反復進行分離，以氯仿 - 甲醇進行梯度洗脫，結合使用重結晶等傳統(tǒng)植物化學手段與制備型高壓液相色譜儀等現(xiàn)代儀器，進行分離純化。 (2) 牛膝藥材薄層色譜研究：中國藥典2010版一部牛膝定性鑒別方法，以β-蛻皮甾酮作為對照品，在實

5、驗中增加了牛膝皂苷Ⅱ和人參皂苷 RO 兩個對照品，共同進行牛膝的薄層鑒別。比較懷牛膝與川牛膝，道地產(chǎn)區(qū)不同產(chǎn)地懷牛膝之間化學成分的差異。 (3) 牛膝藥材含量測定研究：運用HPLC-DAD對色譜條件進行優(yōu)選，最終確定以甲醇 - 水為流動相進行梯度洗脫，同時測定牛膝β-蛻皮甾酮和牛膝皂苷Ⅱ的含量，并進行了相應的方法學考察。實驗中比較了不同產(chǎn)地，不同采收期牛膝中β-蛻皮甾酮和牛膝皂苷Ⅱ的含量。
　　結果： (1) 在實驗中，經(jīng)過反

6、復分離純化，從中分離出4個化合物，通過理化方法及光譜分析鑒定化合物的結構，鑒定了其中2個化合物結構，確定其結構為牛膝皂苷Ⅱ (Saponin Ⅱ )：3-O-β-D- 吡喃葡萄糖醛酸基齊墩果酸 -28-O-β-D- 吡喃葡萄糖苷和人參皂苷RO(Ginsenoside RO)：3-O-β-D-吡喃葡萄糖基( 1→2 ) -β-D- 吡喃葡萄糖醛酸基齊墩果酸 -28-O-β-D- 吡喃葡萄糖苷。 (2) 薄層鑒別試驗研究表明，道地產(chǎn)區(qū)不同產(chǎn)

7、地、不同等級牛膝藥材的斑點數(shù)及Rf值大致相同，僅斑點大小與顏色深淺不同，均可檢出3個特征成分，初步證明β-蛻皮甾酮、牛膝皂苷Ⅱ、人參皂苷 RO 可作為牛膝特征成分進行牛膝鑒別。而與川牛膝的薄層色譜差異較大，均未檢出這三個特征成分。 (3) 本實驗建立的同時測定β-蛻皮甾酮和牛膝皂苷Ⅱ的含量的方法簡單準確，重復性較好，誤差較小，回收率符合規(guī)定( ≥95% )，為今后量化評估牛膝藥材質(zhì)量和含牛膝的復方藥物制劑的質(zhì)量控制提供了參考方法和依據(jù)；

8、所有藥材測定的β-蛻皮甾酮的含量均符合藥典規(guī)定；不同產(chǎn)地藥材中牛膝皂苷Ⅱ的含量相差較大。
　　結論：研究發(fā)現(xiàn)，牛膝藥材中含有大量的皂苷類成分，實驗中利用大孔吸附樹脂富集純化牛膝皂苷類成分有很好的效果，為牛膝皂苷類成分分離的工藝研究提供了一定的依據(jù)。通過質(zhì)量研究和比較，道地懷牛膝中β-蛻皮甾酮和牛膝皂苷Ⅱ含量高于非道地牛膝，并且不同采收期，不同等級含量也有所不同。本課題所建立的薄層，液相色譜條件，方法簡便，重復性好，豐富了牛膝的