天然產(chǎn)物D5、S3及其衍生物抗腫瘤活性的初步研究.pdf

1、本論文從抗腫瘤活性化合物D5出發(fā)，通過(guò)MTT法確定其敏感細(xì)胞株，并對(duì)其同系物和衍生物進(jìn)行了抗腫瘤活性測(cè)定：采用熒光滴定法對(duì)D5的疑似靶蛋白TR3的相互作用進(jìn)行了初步研究，采用正交試驗(yàn)對(duì)TR3的表達(dá)條件進(jìn)行了優(yōu)化，并得到了TR3的晶體。此外，采用MTT法對(duì)S3的抗腫瘤活性進(jìn)行研究，并對(duì)S3及其衍生物SA—1進(jìn)行體外抗腫瘤活性的對(duì)比。采用流式細(xì)胞儀分析技術(shù)，研究化合物S3以及SA—1對(duì)ROS含量、細(xì)胞周期的影響。在此基礎(chǔ)上，對(duì)化合物S3的作

2、用機(jī)制以及急性毒性進(jìn)行了初步研究。 通過(guò)以上研究，獲得了一些有意義的結(jié)果： 1、采用MTT法對(duì)化合物D5的體外抗腫瘤活性進(jìn)行了初步研究。選用9株人源、鼠源的細(xì)胞株對(duì)D5的細(xì)胞毒活性進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明化合物D5對(duì)細(xì)胞的抑制作用具有特異性。在所選的5株腫瘤細(xì)胞株中，人胃癌細(xì)胞BGC—823對(duì)D5最為敏感，其IC50為3.550μg/mL，而化合物D5對(duì)正常細(xì)胞HL7702、Aml—12等細(xì)胞的毒性小于陽(yáng)性對(duì)照。 2、

3、對(duì)GST—TR3(LBD)融合蛋白進(jìn)行體外異源表達(dá)，采用熒光滴定方法檢測(cè)化合物D5與其疑似靶蛋白TR3(LBD)的相互作用。首先，在優(yōu)化并確定M9培養(yǎng)基成分的基礎(chǔ)上，采用4因素3水平的正交試驗(yàn)對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，得出IPTG濃度以及誘導(dǎo)前菌濃是影響目的蛋白表達(dá)量的最關(guān)鍵因素，其中IPTG的最佳濃度確定為0.3mmol/L，最佳菌濃對(duì)應(yīng)OD600約為0.77，在此條件下蛋白表達(dá)量?jī)?yōu)化達(dá)到2.0mg/L(與LB培養(yǎng)基產(chǎn)量近似)。熒光滴定實(shí)驗(yàn)

4、結(jié)果表明，化合物D5與TR3有較強(qiáng)的相互作用，二者的結(jié)合常數(shù)約為2.30×109。 3、采用MTT法對(duì)通過(guò)化學(xué)合成得到的D5的49個(gè)衍生物(包括Zhn、Lix、Wj以及Lwj等系列)進(jìn)行了抗腫瘤活性測(cè)定。以Zhn89(化學(xué)合成的D5)為對(duì)照，經(jīng)過(guò)體外抗腫瘤活性的初步篩選，從49個(gè)化合物中篩選出10個(gè)活性較強(qiáng)的化合物。以啤酒酵母、白色假絲酵母為指示菌，對(duì)以上11個(gè)化合物(包括D5)以及苯環(huán)上帶有三羥基的6個(gè)化合物進(jìn)行抗真菌活性測(cè)定

5、，結(jié)果表明，化合物D5、Zhn89、Zhn111、Zhn196a、Lwj126以及Wj94對(duì)啤酒酵母有較強(qiáng)的抑制作用，其MIC為100μM～140μM；僅有D5對(duì)白色假絲酵母有抑制活性，其MIC為 100μM。 4、選用10株人源、鼠源的細(xì)胞株對(duì)S3的細(xì)胞毒活性進(jìn)行測(cè)定，研究結(jié)果表明，該化合物對(duì)細(xì)胞的抑制作用具有特異性。在所選7株腫瘤細(xì)胞株中，人子宮頸癌細(xì)胞Hela對(duì)S3最為敏感，其IC50為1.275μg/mL?；衔?/p>

6、S3對(duì)正常細(xì)胞HL—7702、Aml—12等的細(xì)胞毒性略低于陽(yáng)性對(duì)照。 5、通過(guò)形態(tài)觀察、DAPI核染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)以及Western blotting等分析方法對(duì)S3的作用機(jī)理進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)該化合物可以誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡。 急性毒性實(shí)驗(yàn)表明其LD50大于2000mg/kg體重，屬低毒化合物，具有進(jìn)一步開發(fā)研究的價(jià)值。 6、化合物SA—1是S3的衍生物，MTT法測(cè)定結(jié)果表明二者對(duì)Heia細(xì)胞均有抑制活