白細(xì)胞炎性遷移抑制劑活體篩選及其分子機(jī)制研究.pdf

1、免疫細(xì)胞的炎性遷移參與了許多人類的免疫相關(guān)疾病的進(jìn)展過(guò)程，因此尋找抑制免疫細(xì)胞炎性遷移的小分子藥物以及研究其調(diào)控機(jī)制對(duì)于免疫相關(guān)疾病的治療具有重要的意義。轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)系
　　TG:(zlyz-GFP)以綠色熒光蛋白特異性標(biāo)記斑馬魚(yú)體內(nèi)的白細(xì)胞，在轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)胚胎尾部靠近末梢循環(huán)處切一個(gè)傷口后的六小時(shí)之內(nèi)，可以觀察到一定數(shù)目的熒光陽(yáng)性細(xì)胞在傷口處的聚集。此活體炎性遷移模型由于可視且可量化，非常適合用于炎性細(xì)胞遷移的機(jī)制探尋以及小分子

2、藥物篩選等。大麻堿Ⅱ型受體CB2或Cnr2（cnr2）對(duì)于免疫細(xì)胞遷移的調(diào)控作用已被廣泛研究，但其調(diào)控機(jī)制尚不明確。我們利用轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)系TG:(zlyz-GFP)進(jìn)行了一次大規(guī)模的小分子化合物篩選，從中篩選得到大麻堿受體激動(dòng)劑與5-磷脂合酶（5-LO或alox5）抑制劑均能有效抑制斑馬魚(yú)白細(xì)胞的炎性遷移。并且篩選得到的小分子均能有效抑制人THP-1細(xì)胞系的體外趨化性遷移。我們還利用鋅指合酶技術(shù)建立了cnr2基因突變的斑馬魚(yú)系。cnr2

3、突變的斑馬魚(yú)胚胎中白細(xì)胞的炎性遷移顯著增加，而敲低Alox5表達(dá)后巨噬細(xì)胞的炎性遷移被明顯抑制。進(jìn)一步的機(jī)制研究結(jié)果表明，Cnr2與Alox5具有通路上的相關(guān)性，并且alox5的轉(zhuǎn)錄直接受轉(zhuǎn)錄因子c-Jun調(diào)控。Cnr2受體受其激動(dòng)劑激動(dòng)后抑制JNK/c-Jun的磷酸酶活性從而抑制alox5基因的表達(dá)。因此我們的研究結(jié)果表明Cnr2通過(guò)JNK通路調(diào)控alox5基因的表達(dá)，從而調(diào)控白細(xì)胞的炎性遷移。而Cnr2激動(dòng)劑與Alox5抑制劑合用時(shí)