胃癌中醫(yī)證型與BCL-2、bax基因表達相關性研究.pdf

1、目的：
　　本次研究是通過大樣本的臨床標本的收集，探索胃癌中醫(yī)證型與目前已知的BCL-2、bax，2個胃癌標志物基因表達的相關性。通過組間的差異性分析，為胃癌中醫(yī)證型分類提供理論和實驗依據(jù)。對闡明基因與中醫(yī)證候之間的關系，認識胃癌的發(fā)生機制,預測其轉歸,也是探求中醫(yī)證候實質的關鍵所在。
　　方法
　　收集陜西中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院2011年5月至2013年2月胃癌住院手術病人120例，收集病人的相關病史、術中情況和中醫(yī)證

2、候四診等相關信息，依據(jù)ITAC2007國際中醫(yī)藥腫瘤學術大會頒布的《中醫(yī)胃癌診療指南（草案）》[1]，將所有病人分為：肝氣犯胃型、胃熱傷陰型、瘀毒內阻型、痰濕凝結型、脾胃虛寒型、氣血虧虛型共6組，采用免疫組化法檢測6組患者胃癌病理切片局部BCL-2、bax表達值，從而找出這兩項指標在胃癌的中醫(yī)證型中的分布的規(guī)律和特點，為胃癌的發(fā)病機制和胃癌的中醫(yī)癥候實質所在提供理論及實驗支持。
　　1.此次研究按照胃癌中醫(yī)分型共收集120個病例，

3、其中肝氣犯胃型共23例，占19.2%；胃熱傷陰型共21例，占17.5%；瘀毒內阻型共18例，占10.0%；痰濕凝結型共16例，占13.3%，脾胃虛寒型共29例，占24.2%；氣血虧虛型共13例，占10.8%。其中脾胃虛寒型最多，證候所占比例從多到少為:脾胃虛寒型>肝氣犯胃型>胃熱傷陰型>瘀毒內阻型>痰濕凝結型>氣血虧虛型。
　　2.采用免疫組化法檢測BCL-2和bax表達，組織切片脫蠟和水化，將切片浸泡在檸檬酸鈉緩沖液中微波抗原修

4、復。以0.3%過氧化氫滅活內源性過氧化物酶和生物素，血清封閉，分別滴加BCL-2和bax一抗（工作濃度均為1:100）、4℃過夜孵化。加入標記的二抗孵育。加入DAB顯色后蘇木精復染、透明，封片。以PBS替代作為陰性對照，用已知陽性切片為陽性對照[2]。
　　3.結果分析：BCL-2陽性表達時主要表現(xiàn)為細胞核和(或)細胞質中呈現(xiàn)棕褐色。bax表達陽性時主要表現(xiàn)為細胞質呈現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。對免疫組化結果評分采用密度和強度結

5、合標準。結果判斷：每張胃癌切片隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)50個細胞，分別根據(jù)染色強度和密度進行評分。①染色強度：陰性為0分；淡黃色為1分；棕黃色計2分；棕褐色計3分。根據(jù)一個視野內陽性細胞所占比例；＜1%計0分；1%至25%計1分；25%至50%計2分；＞50%計3分，結果按照標準公式計算。分為陰性（-）、弱陽性（+）、中等陽性（++）、強陽性（+++）四個等級
　　結論：
　　1.胃癌的中醫(yī)證型分布有規(guī)律可循，其分布規(guī)

6、律為：脾胃虛寒型>肝氣犯胃型>胃熱傷陰型>瘀毒內阻型>痰濕凝結型>氣血虧虛型。
　　2.胃癌證型演變依照以下規(guī)律①以本虛辨證總體中醫(yī)辨證是由肝胃不和向氣血雙虧發(fā)展，由陰虛發(fā)展為陽虛。②以標實辨證法分析演變順序為脾胃虛寒-氣滯血瘀—痰濕凝結及瘀毒內阻。
　　3.Bcl-2、Bax與胃癌腫瘤分級、分期關系。Bcl-2、Bax在胃癌腫瘤不同腫瘤分級、表達不同，但與腫瘤臨床病理分期無明顯相關性。
　　4.胃癌中醫(yī)證候與胃癌相關