胃癌中醫(yī)證型與BCL-2、bax基因表達(dá)相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　本次研究是通過大樣本的臨床標(biāo)本的收集，探索胃癌中醫(yī)證型與目前已知的BCL-2、bax，2個(gè)胃癌標(biāo)志物基因表達(dá)的相關(guān)性。通過組間的差異性分析，為胃癌中醫(yī)證型分類提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。對(duì)闡明基因與中醫(yī)證候之間的關(guān)系，認(rèn)識(shí)胃癌的發(fā)生機(jī)制,預(yù)測(cè)其轉(zhuǎn)歸,也是探求中醫(yī)證候?qū)嵸|(zhì)的關(guān)鍵所在。
　　方法
　　收集陜西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2011年5月至2013年2月胃癌住院手術(shù)病人120例，收集病人的相關(guān)病史、術(shù)中情況和中醫(yī)證

2、候四診等相關(guān)信息，依據(jù)ITAC2007國(guó)際中醫(yī)藥腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)頒布的《中醫(yī)胃癌診療指南（草案）》[1]，將所有病人分為：肝氣犯胃型、胃熱傷陰型、瘀毒內(nèi)阻型、痰濕凝結(jié)型、脾胃虛寒型、氣血虧虛型共6組，采用免疫組化法檢測(cè)6組患者胃癌病理切片局部BCL-2、bax表達(dá)值，從而找出這兩項(xiàng)指標(biāo)在胃癌的中醫(yī)證型中的分布的規(guī)律和特點(diǎn)，為胃癌的發(fā)病機(jī)制和胃癌的中醫(yī)癥候?qū)嵸|(zhì)所在提供理論及實(shí)驗(yàn)支持。
　　1.此次研究按照胃癌中醫(yī)分型共收集120個(gè)病例，

3、其中肝氣犯胃型共23例，占19.2%；胃熱傷陰型共21例，占17.5%；瘀毒內(nèi)阻型共18例，占10.0%；痰濕凝結(jié)型共16例，占13.3%，脾胃虛寒型共29例，占24.2%；氣血虧虛型共13例，占10.8%。其中脾胃虛寒型最多，證候所占比例從多到少為:脾胃虛寒型>肝氣犯胃型>胃熱傷陰型>瘀毒內(nèi)阻型>痰濕凝結(jié)型>氣血虧虛型。
　　2.采用免疫組化法檢測(cè)BCL-2和bax表達(dá)，組織切片脫蠟和水化，將切片浸泡在檸檬酸鈉緩沖液中微波抗原修

4、復(fù)。以0.3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶和生物素，血清封閉，分別滴加BCL-2和bax一抗（工作濃度均為1:100）、4℃過夜孵化。加入標(biāo)記的二抗孵育。加入DAB顯色后蘇木精復(fù)染、透明，封片。以PBS替代作為陰性對(duì)照，用已知陽性切片為陽性對(duì)照[2]。
　　3.結(jié)果分析：BCL-2陽性表達(dá)時(shí)主要表現(xiàn)為細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)棕褐色。bax表達(dá)陽性時(shí)主要表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。對(duì)免疫組化結(jié)果評(píng)分采用密度和強(qiáng)度結(jié)

5、合標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果判斷：每張胃癌切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞，分別根據(jù)染色強(qiáng)度和密度進(jìn)行評(píng)分。①染色強(qiáng)度：陰性為0分；淡黃色為1分；棕黃色計(jì)2分；棕褐色計(jì)3分。根據(jù)一個(gè)視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占比例；＜1%計(jì)0分；1%至25%計(jì)1分；25%至50%計(jì)2分；＞50%計(jì)3分，結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)公式計(jì)算。分為陰性（-）、弱陽性（+）、中等陽性（++）、強(qiáng)陽性（+++）四個(gè)等級(jí)
　　結(jié)論：
　　1.胃癌的中醫(yī)證型分布有規(guī)律可循，其分布規(guī)

6、律為：脾胃虛寒型>肝氣犯胃型>胃熱傷陰型>瘀毒內(nèi)阻型>痰濕凝結(jié)型>氣血虧虛型。
　　2.胃癌證型演變依照以下規(guī)律①以本虛辨證總體中醫(yī)辨證是由肝胃不和向氣血雙虧發(fā)展，由陰虛發(fā)展為陽虛。②以標(biāo)實(shí)辨證法分析演變順序?yàn)槠⑽柑摵?氣滯血瘀—痰濕凝結(jié)及瘀毒內(nèi)阻。
　　3.Bcl-2、Bax與胃癌腫瘤分級(jí)、分期關(guān)系。Bcl-2、Bax在胃癌腫瘤不同腫瘤分級(jí)、表達(dá)不同，但與腫瘤臨床病理分期無明顯相關(guān)性。
　　4.胃癌中醫(yī)證候與胃癌相關(guān)