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文檔簡介
1、目的:
本論文主要應(yīng)用高分辨核磁共振波譜研究新生大鼠在膽紅素腦病不同時(shí)期海馬和小腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的變化,并結(jié)合病理學(xué)改變,闡明新生大鼠膽紅素腦病的發(fā)病機(jī)制。
方法:
將32只足月產(chǎn)9日齡健康新生SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(TG組)和對(duì)照組(CG組),16只/組,經(jīng)頸靜脈插管給藥,TG組鼠注射膽紅素溶液,CG組注射安慰劑,注射劑量均為50mg/kg體重(17μml/g體重)。TG組、CG組分別在4h和幼年
2、期(分別記作T1G、T2G和C1G、C2G)斷頭處死,并采全血測血清膽紅素濃度,8只/時(shí)期。每組隨機(jī)取5只分離雙側(cè)海馬、雙側(cè)小腦半球,經(jīng)速凍、勻漿后做HR1HMRS研究,分析其腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)變化,余下3只取全腦并切取海馬、小腦半球?qū)用媲衅鯤E染色、Tunel染色,觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和損傷凋亡情況,運(yùn)用免疫組化方法檢測T2G組小鼠海馬和小腦內(nèi)GFAP表達(dá)情況。綜合分析各組間不同時(shí)期血清膽紅素濃度,腦組織膽紅素濃度,不同腦區(qū)細(xì)胞損傷情況
3、及神經(jīng)遞質(zhì)含量變化信息,從代謝組學(xué)角度闡明新生兒膽紅素腦病的發(fā)病機(jī)制。
結(jié)果:
1.實(shí)驗(yàn)鼠血清、腦組織膽紅素濃度變化注射膽紅素溶液0.5h后,血清膽紅素高達(dá)531.54±27.58μmol/l,顯著高于閾值濃度342μmol/l;T1G組血清膽紅素濃度較CG組增加了62.35倍(P<0.01); T1G組小鼠腦內(nèi)可檢測出膽紅素(P<0.05)。
2.各腦區(qū)神經(jīng)元損傷或凋亡比較T1G組海馬、小腦內(nèi)
4、陽性細(xì)胞較CG組增多,T2G組海馬、小腦內(nèi)陽性細(xì)胞均多于CG組(p均<0.05);T2G組海馬內(nèi)的陽性細(xì)胞較T1G組明顯增多(p<0.05);T2G組小腦內(nèi)的陽性細(xì)胞較T1G組減少(p<0.05);T1G組海馬內(nèi)的陽性細(xì)胞較小腦多(p<0.05),T2G組海馬內(nèi)陽性細(xì)胞明顯較小腦多(p<0.05)。
3.幼年期鼠各腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)比較與C2G組相比,T2G組海馬、小腦內(nèi)GFAP蛋白表達(dá)數(shù)量增多(p<0.05);
5、海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)GFAP蛋白表達(dá)較小腦多(p<0.05)。
4.實(shí)驗(yàn)鼠各腦區(qū)的代謝物含量變化:
①神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的氨基酸濃度變化:T1G組海馬中的GABA水平較C1G組顯著升高,小腦的Gln水平較C1G組下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);T2G組海馬內(nèi)GABA、Glu、Gln濃度均顯著升高,小腦內(nèi)的GABA濃度升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。
②NAA和Cho: T1G組海馬
6、內(nèi)NAA水平降低,較C1G組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),小腦內(nèi)Cho濃度下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);T2G組海馬和小腦內(nèi)的Cho升高,與C2G組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)③Cr、Suc、Ala、my-Ins、Tau、Gly等其他重要代謝物變化。()T1G組海馬和小腦的Lac、Gly濃度升高,海馬中Suc、小腦中Suc、Tau濃度下降,與C1G組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05);T2G組海馬的Ala、Suc、
7、Cr、Tau及Gly,小腦的Tau濃度升高,與C2G組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。
結(jié)論:
1.經(jīng)頸靜脈插管注射高濃度膽紅素溶液的方法可成功制作出新生大鼠膽紅素腦病動(dòng)物模型。
2.HR1HMRS代謝組學(xué)研究表明新生大鼠膽紅素腦病引起的海馬和小腦神經(jīng)元損傷與該區(qū)域的神經(jīng)遞質(zhì)代謝紊亂有關(guān)。
3.膽紅素神經(jīng)毒性介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷存在區(qū)域性差異,海馬比小腦易感性高;幼年期海馬存在
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