銀杏葉提取物對(duì)有遺傳過(guò)敏傾向臍血Th1Th2免疫狀態(tài)的影響.pdf

1、目的: 變應(yīng)性鼻炎是一種多因素誘發(fā)的I型變態(tài)反應(yīng)性疾病。病因涉及到遺傳、環(huán)境、免疫、自身因素、母親病史(哮喘、變應(yīng)性鼻炎、蕁麻疹等變態(tài)反應(yīng)病史)、社會(huì)行為、經(jīng)濟(jì)狀況、個(gè)體行為及心理因素等諸多方面，其中最重要的是家族史和環(huán)境中的危險(xiǎn)因素。AR主要由經(jīng)常接觸周?chē)覂?nèi)外的各種季節(jié)性和常年性變應(yīng)原引起。花粉類(lèi)(花草，樹(shù)木，雜草)通常引發(fā)季節(jié)性AR，屋內(nèi)塵螨，寵物，霉菌主要引發(fā)常年性AR。不過(guò)，在熱帶和亞熱帶地區(qū)花粉則引發(fā)常年性AR。最近，WHO

2、在ARIA文件中提出，用“間歇性變應(yīng)性鼻炎”和“持續(xù)性變應(yīng)性鼻炎”代替“季節(jié)性變應(yīng)性鼻炎”和“常年性變應(yīng)性鼻炎”。此外呼吸道感染、冷空氣、運(yùn)動(dòng)、精神因素等也是導(dǎo)致變應(yīng)性鼻炎發(fā)生、發(fā)展的重要因素。由于基因的改變短時(shí)間內(nèi)不會(huì)發(fā)生大的波動(dòng)，所以環(huán)境因素仍可能為該病的決定因素。因此目前首要的是采取一些干預(yù)措施控制或改變環(huán)境，避免過(guò)敏原的過(guò)多接觸，逆轉(zhuǎn)變應(yīng)性鼻炎發(fā)病率上升的趨勢(shì)。 細(xì)胞免疫在抗變態(tài)反應(yīng)中發(fā)揮重要作用℃D4+T細(xì)胞根據(jù)表面標(biāo)

3、志不同而分為輔助性T細(xì)胞(Th)1、Th2兩個(gè)功能亞群，Th1分泌IL-2、IFN-γ、TNF-β、IL-12、IL-18，活化巨嗜細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞免疫。Th2Z主要分泌IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF等細(xì)胞因子，其功能是介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，在I型變態(tài)反應(yīng)中起重要作用。正常情況下，受微環(huán)境信號(hào)的影響，兩者的共同前體細(xì)胞Th0細(xì)胞按一定比例分別向Th1和Th2分化，兩者處于相對(duì)平衡狀態(tài)，維持機(jī)體正常免疫功能。正常人出生

4、后弱激活的Th0細(xì)胞受環(huán)境變應(yīng)原的反復(fù)刺激，免疫應(yīng)答下調(diào)，正在建立的免疫記憶過(guò)程轉(zhuǎn)向Th1細(xì)胞，胎兒期免疫偏離的“Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答”被扭轉(zhuǎn)。這一過(guò)程在特應(yīng)癥或過(guò)敏反應(yīng)個(gè)體是被延緩或缺乏的，稱(chēng)之為“免疫背離”，導(dǎo)致生后Th0繼續(xù)向Th2轉(zhuǎn)化，通常在5歲前完成。研究表明：Th1/Th2亞群比例和功能失衡是變應(yīng)性鼻炎的主要免疫發(fā)病機(jī)制，表現(xiàn)為T(mén)h2細(xì)胞數(shù)目增多和功能亢進(jìn)。目前，Th1/Th2群比例和功能失衡在變態(tài)反應(yīng)中的重要作用己得到學(xué)術(shù)界的公

5、認(rèn)，越來(lái)越多的學(xué)者把研究重點(diǎn)放在應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑改善機(jī)體Th1/Th2平衡的免疫治療策略上，通過(guò)檢測(cè)臍血中相關(guān)細(xì)胞因子預(yù)測(cè)特應(yīng)性體質(zhì)患兒并通過(guò)干預(yù)手段改變其易感基因而改善并糾正其過(guò)敏體質(zhì)。 銀杏葉的有效成分為黃酮類(lèi)和銀杏內(nèi)酯類(lèi)，其提取物是一種作用廣泛、不良反應(yīng)較少的天然藥物，具有增強(qiáng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、抗癌、保護(hù)心血管、減輕應(yīng)激反應(yīng)、改善記憶、改善耳鳴、抗衰老、穩(wěn)定精神作用。其作用機(jī)制可能與抗氧化、血小板拮抗劑、改善缺氧、消腫、改善

6、微循環(huán)及血流變有關(guān)。在我國(guó)，銀杏葉用于治療哮喘已有悠久的歷史，自古便是定喘湯的主要成分之一。但銀杏葉提取物是否可以通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡從而調(diào)節(jié)變態(tài)反應(yīng)的報(bào)道，除有動(dòng)物體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡資料，鮮有對(duì)人體變態(tài)反應(yīng)調(diào)節(jié)的報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)探討遺傳影響因素(父母有無(wú)過(guò)敏性疾病史)對(duì)新生兒臍血單個(gè)核細(xì)胞Th1/Th2平衡的影響.探討銀杏葉提取物(EGB)對(duì)有遺傳過(guò)敏傾向新生兒臍血單個(gè)核細(xì)胞增殖和Th1/Th2失衡調(diào)節(jié)

7、的影響.后期計(jì)劃隨訪(fǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)象，首次隨訪(fǎng)在5歲時(shí)，以后每五年定期隨訪(fǎng)，動(dòng)態(tài)觀察環(huán)境因素對(duì)過(guò)敏體質(zhì)的影響；跟蹤調(diào)查實(shí)驗(yàn)對(duì)象兩代以?xún)?nèi)發(fā)病情況，做相關(guān)家系調(diào)查及系譜分析，分析家族繪制遺傳圖譜，進(jìn)一步干擾遺傳因素，從而達(dá)到早期預(yù)防、早期干預(yù)、早期治療變態(tài)反應(yīng)性疾病的目的。 方法： 1.采用問(wèn)卷調(diào)查方式選擇20例新生兒父或母有過(guò)敏性疾病史（AD組)和20例新生兒父母均無(wú)過(guò)敏性疾病史(對(duì)照組)的正常足月新生兒臍血為研究對(duì)象。

8、2.收集臍血血漿并分離單個(gè)核細(xì)胞(CBMC)，體外分別用銀杏葉提取物聯(lián)合植物血凝素(PHA)N激培養(yǎng)24h，48h，72h，單獨(dú)PHA刺激組為對(duì)照組。MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)銀杏葉提取物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-2，IL-4，IFN-γ，GM-CSF的影響。 結(jié)果： 1.血漿中細(xì)胞因子量低下，AD組IL-2、IL-4、GM-CSF與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，IFN-γ無(wú)

9、明顯差異(P＞0.05)。 2.銀杏葉提取物干預(yù)CBMC培養(yǎng)48h后細(xì)胞因子中IL-2，IL-4，IFN-γ，GM-CSF均增多，且AD組與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AD組中EGB干預(yù)組與單純PHA組比較IFN-γ/IL-4差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，IL-2/IL-4差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AD組中EGB干預(yù)后分析GM-CSF與IL-2、IFN-γ呈正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)、與IL-4無(wú)相關(guān)