沉香化氣膠囊促腸動(dòng)力機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:沉香化氣膠囊對(duì)糖尿病大鼠小腸ICC、肌間神經(jīng)叢、CBS的作用
　　目的:探討沉香化氣膠囊對(duì)糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitialcellsofCajal,ICC)、肌間神經(jīng)叢、胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)的影響。
　　方法:將健康雄性SD大鼠分為正常對(duì)照組、DM模型組、DM模型+中藥組。大鼠一次性腹腔注射

2、(ip)鏈脲佐菌素(STZ,60mg/kg)造模,選取成功模型,DM模型+中藥組每天給予中藥灌胃,模型組和正常對(duì)照組每天給予同等容量的蒸餾水,持續(xù)灌胃4周.。所有大鼠干預(yù)4周結(jié)束后。給予印度墨汁灌胃測(cè)定小腸傳輸速率,利用免疫組織化學(xué)和圖像分析觀察十二指腸c-Kit、蛋白基因產(chǎn)物9.5(proteingeneproduct9.5,PGP9.5)、神經(jīng)微絲蛋白(neurofilamentprotein,NFP)、CBS的表達(dá)。
　　結(jié)

3、果:灌胃4周,DM模型+中藥組小腸傳輸速率均比DM模型組明顯增加(71.26±5.22vs45.52±6.42,P<0.01),仍低于對(duì)照組(71.26±5.22vs80.40±7.33,P<0.05);DM模型+中藥組c-Kit、PGP9.5、NFP的陽(yáng)性產(chǎn)物面積和吸光度值均比DM模型組明顯增加(443.28±24.40vs358.83±35.03,889.17±82.75vs445.17±64.06,276.20±63.41vs18

4、2.90±65.21,0.16±0.02vs0.13±0.02,0.24±0.02vs0.15±0.01,0.17±0.01vs0.13±0.01,均P<0.01),仍低于正常對(duì)照組(443.28±24.40vs557.28±42.35,P<0.01;889.17±82.75vs1050.50±90.22,P<0.01;276.20±63.41vs415.40±74.24,P<0.01;0.16±0.02vs0.18±0.02,P<0.

5、05;0.24±0.02vs0.27±0.02,P<0.01;0.17±0.01vs0.21±0.02,P<0.05)。然而DM模型+中藥組組CBS的陽(yáng)性產(chǎn)物面積和平均吸光度值均比DM模型組低(417.03±53.76vs484.20±77.80,P<0.01;0.20±0.03vs0.27±0.03,P<0.01),卻高于正常組(417.03±53.76vs340.57±78.23,P<0.01;0.20±0.03vs0.14±0.0

6、3,P<0.05)。
　　結(jié)論:沉香化氣膠囊促進(jìn)糖尿病大鼠小腸肌間神經(jīng)叢c-Kit、PGP9.5和NFP的表達(dá),降低CBS的表達(dá),提示對(duì)受損的DM大鼠小腸ICC、肌間神經(jīng)叢及氣體遞質(zhì)H2S的生成紊亂有部分恢復(fù)作用,從而對(duì)糖尿病大鼠的腸動(dòng)力障礙有一定的改善效應(yīng)。
　　第二部分:突觸在沉香化氣膠囊改善糖尿病大鼠腸動(dòng)力中的作用
　　目的:探討沉香化氣膠囊對(duì)糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠小腸突觸素(syn

7、aptophysin,Syn)表達(dá)的影響。
　　方法:將健康雄性SD大鼠分為正常對(duì)照組、DM模型組、DM模型+中藥組.大鼠一次性腹腔注射(ip)鏈脲佐菌素(STZ,60mg/kg)造模,選取成功模型,DM模型+中藥組每天給予中藥灌胃,模型組和正常對(duì)照組每天給予同等容量的蒸餾水,持續(xù)灌胃4周。所有大鼠干預(yù)4周結(jié)束后,給予印度墨汁灌胃測(cè)定小腸傳輸速率,利用免疫組織化學(xué)和圖像分析觀察十二指腸突觸素的表達(dá),采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-P

8、CR)和Western-blot分別檢測(cè)了三組小腸肌間神經(jīng)叢中SynmRNA和蛋白的表達(dá)量,以恒定表達(dá)的β-actin作為內(nèi)參照。分別計(jì)算SynmRNA與β-actinmRNA、Syn蛋白與β-actin蛋白表達(dá)積分光密度值的比值(syn/β-actin),以反映組織中SynmRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果:(1)灌胃4周后,DM模型+中藥組小腸傳輸速率均比DM模型組明顯增加(71.26±5.22vs45.52±6.42,P

9、<0.01),仍低于對(duì)照組(71.26±5.22vs80.40±7.33,P<0.05);(2)免疫組化結(jié)果顯示DM模型+中藥組突觸素的陽(yáng)性產(chǎn)物面積和平均吸光度值均比DM模型組明顯增加(832.33±58.78vs488.83±58.56,0.25±0.02vs0.16±0.01,P<0.01),仍低于正常對(duì)照組(832.33±58.78vs937.67±101.23,P<0.05,0.25±0.02vs0.29±0.03,P<0.01

10、)。(3)RT-PCR研究結(jié)果顯示DM+中藥組SynmRNA表達(dá)顯著強(qiáng)于DM組,DM+中藥組syn/β-actin比值明顯較DM組增加(0.107±0.010vs0.085±0.011,P<0.05),但仍低于正常組(0.107±0.010vs0.255±0.011,P<0.05)。(4)westernblot研究結(jié)果顯示DM+中藥組的Syn蛋白表達(dá)也較模型對(duì)照組明顯增強(qiáng),兩組間syn/β-actin比值比較有顯著性意義(0.418±0