TvNHX1基因轉(zhuǎn)化大豆及其耐鹽性分析.pdf

1、鹽脅迫是影響植物生長(zhǎng)、降低農(nóng)作物產(chǎn)量的主要逆境因素之一，提高作物的耐鹽性已成為世界各國(guó)育種工作者研究的焦點(diǎn)。栽培大豆(Glycine max L.)屬于中度耐鹽植物，在我國(guó)有很大的種植面積。通過(guò)植物基因工程技術(shù)將耐鹽基因?qū)氪蠖?，培育耐鹽大豆新品種，對(duì)我國(guó)農(nóng)業(yè)的發(fā)展有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　本研究首先評(píng)價(jià)分析了4個(gè)不同大豆品種對(duì)NaCl脅迫的應(yīng)答與響應(yīng)。未脅迫條件下，耐鹽性強(qiáng)的品種MDA含量和SOD活性顯著高于耐鹽性弱的品種；脅迫后

2、，其MDA含量降低、SOD活性升高。MDA和SOD可以作為大豆耐鹽性篩選指標(biāo)。早期的短時(shí)脅迫對(duì)不同耐鹽性大豆品種的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量影響不同。
　　利用 HindIII和EcoRI對(duì) PBI121-TvNHX1質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，獲得35S:TvNHX1:NosT表達(dá)卡盒片段，將此片段連接到載體pCAMBIA3300中，經(jīng)過(guò)菌落PCR及酶切鑒定，獲得了重組質(zhì)粒P33-TvNHX1，成功構(gòu)建了TvNHX1基因的植物表達(dá)載體。
　　將含有Tv

3、NHX1基因的表達(dá)載體P33-TvNHX1質(zhì)粒，采用花粉管通道法轉(zhuǎn)化大豆5個(gè)不同品種。大豆幼苗2片真葉展開(kāi)后，將其中1片涂上0.03﹪濃度的Basta溶液，對(duì)部分轉(zhuǎn)化株進(jìn)行PPT抗性篩選，PCR擴(kuò)增獲得9株導(dǎo)入了TvNHX1基因的大豆植株，其中22293-1，1株、22021-1，2株、21216-6，3株、22451-1，1株、21066-2，2株。RT-PCR檢測(cè)到轉(zhuǎn)基因植株中TvNHX1基因表達(dá)。
　　在300 mmol/L

4、 NaCl處理下，轉(zhuǎn)TvNHX1基因植株根系與地上部的生長(zhǎng)狀況均明顯好于對(duì)照，轉(zhuǎn) TvNHX1基因植株耐鹽性明顯增強(qiáng)。表明 TvNHX1基因可有效提高大豆對(duì)NaCl的耐受性。轉(zhuǎn)空載體pCAMBIA3300基因的植株與非轉(zhuǎn)基因大豆的表型相同，表明載體骨架對(duì)轉(zhuǎn)化無(wú)影響。同時(shí)顯示花粉管通道法介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法在提高大豆耐鹽性基因工程中是一種可行的技術(shù)。
　　對(duì)T2代轉(zhuǎn)TvNHX1基因大豆植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，從28株大豆中檢測(cè)到20株TvNH