假單胞桿菌Pseudomonasxm耐鹽相關(guān)基因的克隆及其轉(zhuǎn)化初探.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、在廈門鹽場的飽和鹽池水中發(fā)現(xiàn)了一株假單胞桿菌屬的極端嗜鹽細(xì)菌,經(jīng)初步檢測認(rèn)為,該菌可能是一新種,暫定名為Pseudomonasxm.以該菌為材料,制備其總DNA,經(jīng)過限制性內(nèi)切酶Sau3AI部分酶切,回收純化1~9kb大小的DNA片段.撮載體質(zhì)粒pUC19,用Sau3AI的同尾酶BamHI將其切成線狀并用堿性磷酸酶(CIAP)處理,然后用F4DMA連接酶將回收片段與線狀載體連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109,構(gòu)建Pseudomonasxm部分

2、基因組文庫.將獲得的重組轉(zhuǎn)化子挑取至含氨芐青霉素(100μg/ml)和6﹪NACl的LB培養(yǎng)基上篩選出能夠耐鹽的陽性克隆,從中獲得與細(xì)菌耐鹽性有關(guān)的約8.8kb的DNA片段.由于該4.2kbDNA片段可能帶有較完整的轉(zhuǎn)錄構(gòu)件,將其與植物雙元質(zhì)粒載體pCAMBIA1301重組,轉(zhuǎn)化空心菜愈傷組織,瞬時(shí)表達(dá)檢測呈陽性;再通過SouthernBlot證明,該4.2kb外源DNA片段已經(jīng)整合至植物基因組中.因此可以初步認(rèn)為,我們已經(jīng)初步建立起了

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