擬南芥耐鹽基因AtNHX5的大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、大豆是世界上重要的糧食和油料作物,但受環(huán)境等因素的影響,大豆的產(chǎn)量和品質(zhì)受到一定制約。在我國(guó)由于干旱面積、鹽堿地和次生鹽堿化耕地的面積逐年增加,可耕種面積逐漸減少,嚴(yán)重制約著我國(guó)農(nóng)作物的生產(chǎn)。因此,抗逆新品種的培育成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)和重點(diǎn)。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將抗逆基因轉(zhuǎn)入大豆,為培育大豆抗逆新品種開(kāi)辟了新途徑。本研究以河北省優(yōu)質(zhì)大豆品種為材料,利用胚尖法以及整體子葉節(jié)法進(jìn)行了擬南芥耐鹽基因AtNHX5(CPA1家族的擬南芥Na+／H+逆

2、向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因)的遺傳轉(zhuǎn)化。獲得主要結(jié)果如下:
　　 1、通過(guò)形態(tài)學(xué)方法初步確定了河北省優(yōu)質(zhì)大豆品種冀豆17號(hào)、五星2號(hào)、nf58和冀黃13號(hào)的潮霉素敏感性,為轉(zhuǎn)化植株的篩選確定適宜濃度。結(jié)果表明五星2號(hào)和冀豆17號(hào)的潮霉素篩選終濃度為10 mg／L,冀黃13號(hào)與nf58的篩選終濃度為8mg／L。
　　 2、以五星2號(hào)成熟大豆胚尖為材料,利用超聲波輔助農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法優(yōu)化了大豆胚尖轉(zhuǎn)化體系。侵染階段對(duì)胚尖進(jìn)行兩次80 W的超

3、聲波處理,每次20 s,與對(duì)照相比超聲波處理明顯提高了轉(zhuǎn)化效率。在此基礎(chǔ)上,以五星2號(hào)、五星3號(hào)、冀豆15號(hào)、冀豆16號(hào)和冀黃13號(hào)胚尖為外植體,利用超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行了擬南芥耐鹽基因AtNHX5的遺傳轉(zhuǎn)化。對(duì)五星2號(hào)再生植株在開(kāi)花期進(jìn)行PCR驗(yàn)證,初步證明AtNHX5基因已整合到五星2號(hào)基因組,轉(zhuǎn)化率為0.16％。
　　 3、利用新型整體子葉節(jié)法進(jìn)行了AtNHX5基因轉(zhuǎn)化研究。以帶有一片子葉的胚軸為外植體,以帶Bast