鹽地堿蓬SsNHX1基因及擬南芥AtNHX1、AtNHX5基因的功能分析.pdf

1、　　本實驗利用植物表達載體pROKⅡ和農(nóng)桿菌GV3101將SsNHX1(全長1665bp)、SsNHX2(N端缺失形式，缺失SsNHX1N端49個氨基酸，長1530bp)、AtNHX1(全長1614bp)及AtNHX5(全長1554bp)基因在擬南芥中過量表達。在含40mg/L卡那霉素的培養(yǎng)基上篩選獲得SsNHX1和SsNHX2的純合轉化子，并對其進行了分子鑒定和耐鹽性分析。因時間和工作量關系，只篩選到AtNHX1、AtNHX5的T1代

2、轉化子。SsNHX1和SsNHX2的純合轉化子的分子鑒定及耐鹽性分析結果如下：1.Southern雜交結果顯示，野生型植株(對照)沒有明顯的雜交信號，轉基因株系有強陽性信號。表明SsNHX1、SsNHX2的確已經(jīng)整合到擬南芥的基因組中，但不同株系插入拷貝數(shù)不等。2.Northern雜交結果顯示轉基因植株均有雜交信號，表明插入擬南芥中的SsNHX1、SsNHX2已經(jīng)正常轉錄，但野生型擬南芥也有雜交信號，可能是內(nèi)源的AtNHX與SsNHX同

3、源性很高，探針與AtNHX結合的結果。不同轉基因株系雜交信號強弱不同，表明不同株系表達量不同。3.200mMNaCl處理下轉基因株系生長情況好于野生型對照。但轉SsNHX1和SsNHX2的株系長勢沒有顯著差異。4.測量不同濃度NaCl(0，100，200mM)處理后野生型和轉基因植株的干重、鮮重，結果表明脅迫下不同轉基因植株的干重、鮮重均高于對照，但轉SsNHX1和SsNHX2的株系干鮮重沒有顯著差異。5.測量不同濃度NaCl(0，10