遼寧堿蓬SlPEAMT基因啟動(dòng)子分離及鹽誘導(dǎo)功能分析.pdf

1、磷酸乙醇胺氮甲基轉(zhuǎn)移酶(PEAMT)是合成膽堿的關(guān)鍵酶，膽堿是合成甜菜堿的底物，甜菜堿是一種小分子滲透調(diào)節(jié)劑，在植物抵抗?jié)B透脅迫中起一定的作用。已經(jīng)克隆了多種植物的PEAMT基因，該基因的表達(dá)受鹽誘導(dǎo)。本文對(duì)遼寧堿蓬SIPEAMT啟動(dòng)子進(jìn)行研究。主要內(nèi)容與結(jié)果如下：
　　 通過(guò)TAIL-PCR方法獲得了遼寧堿蓬SIPEAMT基因上游序列(1450bp)，TSSP-TCM軟件預(yù)測(cè)位于起始密碼子上游-340bp處的T是轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，

2、由此獲得了SIPEAMT基因上游897bp的啟動(dòng)子序列。PLACE和PlantCARE序列分析表明，SIPEAMT啟動(dòng)子序列含有基本的轉(zhuǎn)錄元件：TATA-box和非生物脅迫相關(guān)元件：MYBCORE，MBS，LTR，W-box，MYC識(shí)別位點(diǎn)，GT-1元件，WRKY710S和LTRECOREATCOR15等。
　　 為了進(jìn)一步研究獲得的啟動(dòng)子的功能，我們對(duì)遼寧堿蓬SIPEAMT基因啟動(dòng)子進(jìn)行了5’端缺失分析，通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得了3

3、個(gè)5’端缺失片段，分別為pP1(-897～+343bp)、pP2(-817～+343bp)、pP3(-364～+343bp)。將缺失片段分別插入到pCAMBIA1301載體中來(lái)替代CaMV35S啟動(dòng)子，獲得了缺失表達(dá)載體，分別命名為pCAMBIA1301-pP1，pCAMBIA1301-pP2和pCAMBIA1301-pP3。
　　 通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)轉(zhuǎn)化法獲得了各缺失載體轉(zhuǎn)基因煙草。經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)、GUS組織化學(xué)染色檢測(cè)，獲

4、得轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株。
　　 通過(guò)GUS組織化學(xué)染色和熒光定量分析研究轉(zhuǎn)基因煙草中各啟動(dòng)子缺失片段的鹽誘導(dǎo)功能特性。非脅迫條件下，轉(zhuǎn)基因煙草葉片的GUS酶活性低。鹽脅迫處理后，轉(zhuǎn)基因煙草葉片GUS酶活性有顯著的提高。在250mmolL-1NaCl情況下，pP1(-897～+343bp)啟動(dòng)子片段的轉(zhuǎn)基因煙草的GUS酶活性比未經(jīng)脅迫處理的增加18.6倍。
　　 本研究表明，SIPEAMT基因啟動(dòng)子pP1(-897to+343b