遼寧堿蓬SINAC8基因克隆和功能分析.pdf

1、NAC轉(zhuǎn)錄因子是植物細胞中特有的一類調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育、與植物抵御生物和非生物脅迫密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，它通過與植物細胞中的其他基因啟動子中的順式作用元件相結(jié)合，來實現(xiàn)對相關(guān)生命活動的基因表達的促進或抑制。
　　遼寧堿蓬（Suaeda liaotungensisK.）是一種耐鹽性很強的鹽生植物，它可以生活在高鹽堿度的自然區(qū)域內(nèi)，其細胞中一定含有大量與抗鹽脅迫相關(guān)的基因。通過研究遼寧堿蓬的非生物脅迫抗性基因和抗逆機制，可以為增強其他經(jīng)濟

2、作物的非生物脅迫抗性提供更多的理論依據(jù)和基因來源。
　　本研究從實驗室前期工作得到的遼寧堿蓬轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選得到一條EST序列，命名為SlNA C8。通過PCR技術(shù)，擴增得到了750 bp具有完整開放閱讀框(ORF)的SlNAC8cDNA序列，開放閱讀框576 bp，編碼191個氨基酸。通過構(gòu)建SlNAC8的系統(tǒng)進化樹，并對SlNAC8編碼的蛋白與其他NAC蛋白進行多序列比對，初步分析認為SlNAC8屬于NAM亞家族。
　　

3、采用實時定量PCR技術(shù)，對SlNAC8在遼寧堿蓬不同器官中、不同非生物脅迫（高鹽、低溫、干旱、ABA）不同時間的表達特性進行分析。結(jié)果表明，非脅迫處理條件下，SlNAC8基因在遼寧堿蓬不同器官中的表達情況不同，葉中表達量高，莖中其次，根中最低。在不同的非生物脅迫下，SlNAC8的表達都呈現(xiàn)升高的趨勢，但是不同脅迫下，呈現(xiàn)最高表達的時間點不同，并且在鹽脅迫、低溫脅迫和ABA脅迫中，SlNAC8的表達量呈現(xiàn)顯著趨勢。SlNAC8基因響應高鹽

4、、低溫、ABA脅迫。
　　基因槍法將連有SlNA C8的瞬時表達載體pEGAD-GFP-SlNA C8轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細胞，發(fā)現(xiàn)SlNAC8蛋白定位于細胞核中。將SlNAC8的N端、C端和ORF分別連接酵母表達載體，將表達載體轉(zhuǎn)化酵母菌進行轉(zhuǎn)錄激活實驗，實驗表明，SlNAC8的C端和ORF全長具有轉(zhuǎn)錄激活活性。亞細胞定位、轉(zhuǎn)錄激活活性分析結(jié)果顯示，SlNAC8是轉(zhuǎn)錄因子。
　　構(gòu)建pBI121-SlNA C8植物表達載體，蘸花法