羅格列酮對間皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞水孔蛋白-1表達(dá)的影響.pdf

1、超濾衰竭是患者退出腹膜透析（腹透）的主要原因之一。PPAR-g家族是近年來倍受關(guān)注的核受體之一，前期的動(dòng)物體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)：使用PPAR-g激動(dòng)劑-羅格列酮可以增加腹透超濾量，但其機(jī)制目前尚不清楚。水孔蛋白-1是腹膜跨細(xì)胞水轉(zhuǎn)運(yùn)通道，在人腹膜間皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上都有表達(dá)，和腹透超濾量密切相關(guān)。本研究旨在通過體外研究探討羅格列酮對人腹膜間皮細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞水孔蛋白-1基因及蛋白質(zhì)水平表達(dá)的影響。該研究主要分為四部分。 第一部分、人

2、腹膜間皮細(xì)胞（HPMCs）和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）的培養(yǎng)和鑒定 使用胰酶消化法培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞，免疫組化鑒定示角蛋白陽性、波形蛋白陽性，CD54陰性、Ⅷ因子陰性。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞屬原代培養(yǎng)細(xì)胞，購自美國的Cascade公司。 第二部分、羅格列酮對人腹膜間皮細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響 實(shí)驗(yàn)共分為4組：（1）對照（C）組：含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)液；（2）Rosiglitazone（R

3、）組：在對照組的基礎(chǔ)上，加10uM羅格列酮的DMEM培養(yǎng)液；（3）GW9662（GW）組：在對照組的基礎(chǔ)上，加20uM PPAR-g拮抗劑（GW9662）的DMEM培養(yǎng)液；（4）GW+R組：在對照組的基礎(chǔ)上，加PPAR-g拮抗劑（GW9662）的DMEM培養(yǎng)液提前作用1h后，加入含10uM羅格列酮的DMEM培養(yǎng)液（GW+R）。用CCK-8法檢測羅格列酮對人腹膜間皮細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果顯示：與對照組比較，R組對H

4、PMCs和HUVECs二種細(xì)胞生長的影響無顯著差異。HPMCs中，GW+R組在各時(shí)間的增殖均顯著低于正常對照組。而HUVECs中，GW組以及GW+R組在各實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖都高于對照組。 第三部分、羅格列酮對人腹膜間皮細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞水孔蛋白-1基因水平表達(dá)的影響 Real-time PCR法檢測羅格列酮對人腹膜間皮細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞水孔蛋白-1基因水平表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：羅格列酮可以上調(diào)HPMCs和HUVECs

5、水孔蛋白-1基因水平的表達(dá)，GW9662可以下調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1基因水平的表達(dá)，羅格列酮上調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1基因水平的表達(dá)的作用部分被GW9662所拮抗，這些差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 第四部分、羅格列酮對人腹膜間皮細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞水孔蛋白-1蛋白質(zhì)水平表達(dá)的影響 Western Blotting 法檢測羅格列酮對人腹膜間皮細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞水孔蛋白-1蛋白質(zhì)水平表達(dá)量的變化。結(jié)果顯

6、示：羅格列酮可以上調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1蛋白質(zhì)表達(dá)量，GW9662可以下調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1蛋白質(zhì)表達(dá)量，羅格列酮上調(diào)HPMCs和HUVECs水孔蛋白-1蛋白質(zhì)表達(dá)的作用部分被GW9662拮抗，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 總結(jié):研究發(fā)現(xiàn)羅格列酮可以上調(diào)人腹膜間皮細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞水孔蛋白-1的基因和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，結(jié)合水孔蛋白-1在腹膜水轉(zhuǎn)運(yùn)中所起的關(guān)鍵作用，提示羅格列酮可能通過水孔蛋白-1而影響腹膜