超臨界快速膨脹法制備厚樸SCF-CO-,2-提取物超微顆粒及其溶出度和藥動學(xué)考察.pdf

1、目的：隨著現(xiàn)代新型提取分離精制技術(shù)的發(fā)展，如超臨界流體萃取技術(shù)等，使得中藥易氧化、脂溶性及易揮發(fā)的有效成分得到了很好的提取分離。但這些有效成分脂溶性較強，體內(nèi)吸收差、生物利用度低，因而得不到很好的臨床應(yīng)用，如何提高這些難溶性藥物的溶出度以及生物利用度，突破制劑“瓶頸”，增加臨床應(yīng)用前景，是中藥現(xiàn)代化的重要研究內(nèi)容之一。超臨界流體快速膨脹法（Rapid expansion of supercritical solutions，RESS），

2、是近年來發(fā)展起來的制備藥物微粒子的新方法，所得到的微米甚至納米級粒子大大提高了藥物的溶解性，為難溶性藥物提供了新的增加溶出度的方法；而且在常溫下的可操作性，也為中藥提取物中的脂溶性強、易氧化、易揮發(fā)成分的制劑研究提供了新的方法。國內(nèi)外對該技術(shù)已有較多研究，但對中藥提取物的微?；芯炕緦儆诳瞻住１緦嶒炇褂弥兴幒駱愠R界二氧化碳（SCF-CO2）提取物為實驗原料，利用RESS技術(shù)制備了厚樸SCF-CO2提取物超微顆粒和納米液，以此探討該技

3、術(shù)應(yīng)用于中藥領(lǐng)域的可行性和優(yōu)越性，并對制備粒子的各個因素進行了考察。 方法： 1．RESS制粒原理先將溶質(zhì)溶解在超臨界流體中，然后使超臨界流體在非常短的時間（約10-5S）內(nèi)通過特制噴嘴（20-200μm）進行減壓膨脹，溫度壓力的突然變化使得溶質(zhì)的過飽和度驟然升高，并在極短的時間內(nèi)微核快速生長，形成粒度均勻的微米甚至納米級超微顆粒。RESS過程中粒子容易發(fā)生聚集，一般制備得到的粒子為微米或近納米級，粒徑分布范圍較寬。超臨

4、界快速膨脹溶液接收法（RSOLV），是將超臨界溶液直接噴射到空氣中改為噴射到液體溶液中，能夠有效防止粒子聚集，可制備得到分散性良好的納米級顆粒。 2．制粒原料的前處理由于中藥厚樸SCF-CO2提取物成分復(fù)雜，對其制粒時，粒子形狀極不規(guī)則、易聚集、具有油粘性，實驗中嘗試了多種輔料來改善粒子形態(tài)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)原料中混合一定比例的β-環(huán)糊精后，能夠明顯的改善粒子形態(tài)、降低油粘性，實驗中以厚樸SCF-CO2提取物：β-環(huán)糊精按質(zhì)量比1：2混

5、合為制粒原料，進行厚樸提取物超微顆粒和納米液的制備。 3．工藝優(yōu)選以平均粒徑、厚樸酚（magnolol，MN）、和厚樸酚（honokiol，HN）的總酚含量為考察指標(biāo)，采用L9（33）正交實驗，對影響RESS制備厚樸SCF-CO2提取物超微顆粒和納米液的主要因素（萃取壓力A、噴嘴孔徑B、萃取溫度C）進行優(yōu)選。 4．粒子評價按最佳工藝制備厚樸SCF-CO2提取物超微顆粒和納米液，采用掃描電鏡、激光散射儀、HPLC，對粒子的

6、形態(tài)、粒徑及粒子中有效成分含量進行考察，并結(jié)合溶出實驗和動物實驗對RESS超微顆粒和厚樸提取物顆粒的溶出度和藥動學(xué)參數(shù)進行比較。 溶出度實驗精密稱取RESS粉末粒子約105．0mg（粒子中HN與MN總量約為100．0mg）、原料粒子125．0mg（粒子中HN與MN總量為100．0mg）各三份，進行溶出度實驗。按藥典2005年版第二部溶出度測定法中轉(zhuǎn)藍法，以15%甲醇為溶出介質(zhì)，溶出介質(zhì)體積為900mL，轉(zhuǎn)速為100 r·min-

7、1，溫度為37℃，分別于5，10，20，30，45，60，90 min定點取樣5 mL（同時立即補充釋放介質(zhì)5 mL），微孔濾膜過濾，取濾液25μL，HPLC法測定。根據(jù)回歸方程計算出各時間點MN、HN的量，以兩者之和作為溶出量，采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析法，比較兩組粒子的溶出度是否有顯著差異。 動物實驗取108只清潔級SD大鼠，雄性（體重276g±28g），平均分為A，B兩組，給藥前禁食12h，A組灌胃原料粒子混懸液（45%乙

8、醇為溶劑，HN、MN含量分別為10．06 g·L-1、8．53 g·L-1），B組灌胃RESS粒子混懸液（45%乙醇為溶劑，HN、MN的含量分別為10．27 g·L-1、8．26 g·L-1），每只大鼠灌胃5ml，再將A，B組各自分為9個小組，每個小組6只大鼠代表一個時間點，共9個時間點，分別為給藥后0．5h、0．8h、1．2h、1．5h、2．5h、4h、7h、12h、24h，每只大鼠心臟取血1．5mL，置肝素預(yù)先處理的EP管中，800

9、0r·min-1離心6min，分離血漿，-20℃保存?zhèn)溆谩?結(jié)果： 1．粒子形態(tài)和粒徑分布RESS制備的粒子為白色粒子，于掃描電鏡下觀察為不規(guī)則塊狀或片狀，粒子間較為分散，采用SPM顯微圖像分析軟件，對電鏡圖中420個粒子進行分析統(tǒng)計，計算得平均粒徑為4．7μm，粒徑分布在0．2～24．1μm之間；厚樸提取物粒子為橘黃色，具油粘性，掃描電鏡下觀察呈團狀或塊狀，粒子與粒子緊密粘聚。RESOLV納米液為乳白色澄明液體，原子力

10、顯微鏡下觀察呈類球形，平均粒徑為303．0nm，粒子分布在193．6～467．5nm之間。 2．正交實驗RESS粒子9個樣品的平均粒徑分布在4．7～10．2μm之間，萃取壓力、噴嘴孔徑及溫度的變化對粒徑的影響均不存在顯著差異（P>0．05）；9個樣品中平均總酚含量分布在75．1%～90．3%之間，萃取溫度和萃取壓力的變化對總酚含量的影響存在顯著差異（F=26．965，P=0．036； F=21．309，P=0．045），各因素主

11、次為C>A>B，綜合粒徑和總酚含量的影響，結(jié)合粒子制備時能源消耗、產(chǎn)率等實際情況，選擇最佳制備工藝條件為A282C3，在此條件下制備的粒子平均粒徑為4．7μm，總酚含量為91．2%。 RESOLV納米液9個樣品的平均粒徑分布在201．0～311．3nm之間，噴嘴孔徑水平之間的變化對粒徑的影響存在顯著差異（F=25．080，P=0．038），各因素主次為B>A>C；9樣品液中總酚濃度在0．017～0．169g·L-1之間，萃取溫

12、度水平間的變化對總酚含量的影響存在顯著差異（F=25．278，P=0．038），各因素主次為C>B>A，綜合粒徑和總酚含量的影響，結(jié)合粒子制備時能源消耗、產(chǎn)率等實際情況，選擇最佳制備工藝條件為A283C3，在此條件下制備的粒子平均粒徑為303．0nm，總酚含量為0．172 g·L-1。 3．溶出度實驗原料粒子90min內(nèi)，15%的甲醇中累積溶出量為6．37mg·L-1；RESS粒子90min內(nèi)，15%的甲醇中累積溶出量為14．7

13、7mg·L-1。統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，90min內(nèi)，15%的甲醇中RESS粒子的溶出度顯著高于原料粒子溶出度（F=73．59，P=0．001），所有時間水平間均存在顯著差異（F=233．683，P=0．000），時間與組別有顯著的交互效應(yīng)（F=51．149，P=0．000），兩者變化趨勢明顯不同。 4．動物實驗兩組大鼠分別灌胃原料粒子混懸液和RESS粒子混懸液后，于不同時間點測定血藥濃度，得HN、MN的平均血藥濃度．時間曲線，采用W