二氧化碳?xì)飧箟毫?duì)子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型異位灶影響的細(xì)胞和分子機(jī)制研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)是臨床婦科常見病之一,多發(fā)生于生育年齡婦女,臨床上主要表現(xiàn)為經(jīng)期出血、痛經(jīng)、盆腔疼痛以及不孕。近年來(lái),由于腹腔鏡的廣泛應(yīng)用,該病的診斷率不斷提高。腹腔鏡是診斷的金標(biāo)準(zhǔn),除可明確診斷、確定分期外,還可進(jìn)行相應(yīng)治療。藥物治療的復(fù)發(fā)率較高,隨不同臨床分期、不同隨訪期限和不同的藥物種類而產(chǎn)生不同的結(jié)果,3年內(nèi)復(fù)發(fā)率最高可達(dá)61.5％。手術(shù)與藥物聯(lián)合治療效果優(yōu)于單用藥物或手術(shù)治療。采用藥物治療或

2、保守性及半保守性手術(shù)(經(jīng)腹腔鏡或腹部手術(shù)),對(duì)未生育及年輕婦女保留了生育功能及內(nèi)分泌功能,復(fù)發(fā)卻是棘手問(wèn)題。子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制目前仍未明確,分子生物學(xué)研究表明,子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病具有粘附(Adhesion)、侵襲(Aggressive)和血管生成(Angiogenesis)三部曲組成,對(duì)于3A模式的研究已成為近年來(lái)的熱點(diǎn)。不斷加強(qiáng)基礎(chǔ)研究,尋求更為完善的治療對(duì)策,避免復(fù)發(fā),仍需進(jìn)一步研究。我們?cè)谧訉m內(nèi)膜異位癥的臨床治療中發(fā)現(xiàn),腹

3、腔鏡術(shù)后子宮內(nèi)膜異位癥的復(fù)發(fā)率顯著低于其他研究報(bào)道的結(jié)果。除與異位癥臨床分期、腹腔鏡手術(shù)技術(shù)與治療的徹底性等因素相關(guān)外,腹腔鏡手術(shù)時(shí)氣腹對(duì)異位灶有無(wú)影響目前尚無(wú)相關(guān)研究。有較多研究顯示,腹腔鏡手術(shù)時(shí),CO2氣腹可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞術(shù)后種植與轉(zhuǎn)移,增加了術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性。CO2氣腹作用于子宮內(nèi)膜異位癥病灶是否會(huì)產(chǎn)生一系列細(xì)胞與分子生物學(xué)改變,從而影響腹腔鏡術(shù)后子宮內(nèi)膜異位癥的復(fù)發(fā),目前尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道。本研究的目的在于建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型

4、,觀察不同氣腹壓力作用對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥病灶的影響及相關(guān)細(xì)胞和分子機(jī)制研究,評(píng)價(jià)氣腹壓力對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥術(shù)后復(fù)發(fā)的影響。 第一部分 CO2氣腹對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型成模的影響 目的：評(píng)價(jià)CO2氣腹對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥造模成功率的影響及對(duì)EMs大鼠模型異位病灶和血清中相關(guān)細(xì)胞因子和分子生物學(xué)指標(biāo)的變化。 方法：按照誘發(fā)性子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型的建模方法建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型,雌性SD大鼠,體重250～300g,造模

5、前1d肌注苯甲酸雌二醇0.1ml/kg使動(dòng)物統(tǒng)～處于動(dòng)情期。切除一側(cè)子宮,取自體子宮內(nèi)膜縫合于兩側(cè)腹膜。麻醉后隨機(jī)分組,每組10只。分別于造模不同時(shí)間(A：造模術(shù)前、B：造模術(shù)后第4d、C：造模術(shù)后第10d)模擬CO2氣腹作用,壓力15mmHg,時(shí)間1h,對(duì)照組無(wú)氣腹干預(yù),于造模4w后觀察不同處理組與對(duì)照組的成模情況及異位灶和血清細(xì)胞因子、分子生物學(xué)等指標(biāo)變化,評(píng)價(jià)CO2氣腹對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥造模成功率的影響。 結(jié)果：造模不同時(shí)期

6、(造模術(shù)前、造模術(shù)后第4d、10d)CO2氣腹作用后,造模4w后對(duì)照組成模率100％(10/10),CO2氣腹作用后的3組成模率分別為A組100％(10/10)、B組70％(7/10)、C組80％(8/10)。A組的侵襲、粘附和血管生成相關(guān)指標(biāo)水平稍高于對(duì)照組(P<0.05)或與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。B、C組侵襲、粘附和血管生成相關(guān)的細(xì)胞因子水平多低于A組和對(duì)照組(P<0.05),并且兩組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

7、 結(jié)論:CO2氣腹降低子宮內(nèi)膜異位癥造模成功率,對(duì)異位病灶的侵襲、粘附和血管生成等具有抑制作用。 第二部分 不同氣腹壓力對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型異位病灶侵襲、粘附和血管生成等方面的影響 目的：評(píng)估不同氣腹壓力對(duì)子宮內(nèi)膜異位灶及血清與粘附、侵襲和血管生成相關(guān)因子的變化水平及其與術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)因素分析。 方法：造模成功后隨機(jī)分組(每組10只)：對(duì)照組、10mmHg和20mmHg CO2氣腹組,作用時(shí)間1h,術(shù)畢時(shí)行右

8、側(cè)異位灶剝除術(shù),放盡囊液后重新縫合于該側(cè)腹膜處。氣腹干預(yù)后1w、2w、6w檢測(cè)氣腹對(duì)子宮內(nèi)膜異位灶侵襲(MMP2/TIMP-1)、粘附(CD44v6、ICAM-1)、血管生成相關(guān)因子(VEGF/ENS、TNF-α)的影響,及血清相應(yīng)細(xì)胞因子變化水平,評(píng)估不同氣腹壓力對(duì)子宮內(nèi)膜異位灶及血清相關(guān)因子的變化水平及其與術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)因素分析。 結(jié)果：與對(duì)照組比較術(shù)后早期(1周)10mmHg和20mmHg CO2氣腹組對(duì)子宮內(nèi)膜異位灶侵襲、

9、粘附和血管生成等相關(guān)因子水平均顯著降低(P<0.05),且10mmHg組低于20mmHg組(P<0.05),這種影響在10mmHg組多可持續(xù)至術(shù)后2周以后。同組內(nèi)行異位灶剝除術(shù)復(fù)種于腹膜處的異位灶仍能繼續(xù)生長(zhǎng),相關(guān)細(xì)胞因子水平變化與另一側(cè)未剝離的異位灶相似(P>0.05)。隨著氣腹干預(yù)后時(shí)間變化,各組相關(guān)細(xì)胞因子水平逐漸升高,術(shù)后6周與對(duì)照組無(wú)差異(P>0.05)。 結(jié)論：氣腹壓力較低者對(duì)于異位病灶的侵襲、粘附和血管生成等抑制作

10、用優(yōu)于高氣腹壓力和對(duì)照組,可能是腹腔鏡術(shù)后復(fù)發(fā)率低的因素之一。氣腹作用后未剝除的異位灶與剝除后殘留于腹腔內(nèi)的異位灶具有相似的侵襲能力。 第三部分 不同氣腹壓力對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型異位病灶細(xì)胞凋亡和細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)的影響 目的：觀察異位病灶腺細(xì)胞細(xì)胞凋亡和其它細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)改變,進(jìn)一步評(píng)價(jià)CO2氣腹壓力對(duì)子宮內(nèi)膜異位灶的影響及術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)因素分析。 方法：造模成功后隨機(jī)分組(每組5只)：對(duì)照組、10mmHg和2

11、0mmHg CO2氣腹組，作用時(shí)間1h，手術(shù)結(jié)束后取子宮內(nèi)膜異位灶及臨近腹膜行電鏡檢查，觀察異位病灶腺上皮細(xì)胞凋亡和其它細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)改變，進(jìn)一步評(píng)價(jià)CO2氣腹壓力對(duì)子宮內(nèi)膜異位灶的影響及術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)因素分析。 結(jié)果：對(duì)照組異位灶腺細(xì)胞結(jié)構(gòu)良好，基質(zhì)細(xì)胞排列整齊；腹膜間皮細(xì)胞排列整齊，微絨毛正常。10mmHg和20mmHg CO2氣腹組均有異位灶腺細(xì)胞凋亡增加，線粒體嵴消失、線粒體腫脹明顯；微絨毛消失，細(xì)胞連接縫隙增寬斷裂，基

12、底層細(xì)胞排列紊亂。與10mmHg比較，20mmHg氣腹組異位灶細(xì)胞受損嚴(yán)重。 結(jié)論：CO2氣腹可促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位灶腺細(xì)胞凋亡及超微結(jié)構(gòu)破壞，降低其侵襲能力，20mmHg組損傷作用稍大。但氣腹壓力過(guò)高可能導(dǎo)致腹膜間皮細(xì)胞及基底細(xì)胞受損更為嚴(yán)重，從而降低了腹膜的防御能力，故臨床手術(shù)時(shí)氣腹壓力不宜過(guò)高。 全文結(jié)論： 1、CO2氣腹降低子宮內(nèi)膜異位癥造模成功率，對(duì)異位病灶的侵襲、粘附和血管生成等具有抑制作用。 2