體外三維培養(yǎng)條件下肝癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是原發(fā)性肝癌中最主要的、最普遍的一種，并以高死亡率在世界范圍位列癌癥的第六位。HCC具有進(jìn)展速度快，病灶轉(zhuǎn)移廣，預(yù)后效果差，難治愈易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)。HCC細(xì)胞的這種高轉(zhuǎn)移潛能和其與細(xì)胞外微環(huán)境（主要包括間質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、可溶性細(xì)胞因子以及生長(zhǎng)因子等）相互作用密切相關(guān)。傳統(tǒng)的二維（two-dimensional,2D）細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)因很少引入細(xì)胞外基質(zhì)而不能提供一個(gè)很好的

2、細(xì)胞生長(zhǎng)微環(huán)境支持腫瘤－間質(zhì)的相互作用，進(jìn)而不能在HCC的黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移的分子作用機(jī)制方面更好進(jìn)行研究。因此，運(yùn)用再造細(xì)胞外基質(zhì)（比如collagenI、Matrigel等）的三維細(xì)胞培養(yǎng)模型（three-dimensional,3D）建立起來了。3D細(xì)胞培養(yǎng)模型在體外構(gòu)建與體內(nèi)相近的細(xì)胞發(fā)育結(jié)構(gòu)系統(tǒng)，能更好模擬細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，體現(xiàn)腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞間的相互作用過程，反映腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)之間作用的機(jī)理；還能重現(xiàn)人體腫瘤細(xì)胞局部黏附、侵

3、襲以及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的過程，以便于對(duì)腫瘤黏附，遷移和侵襲的分子作用機(jī)制更好的研究。
　　HAb18G/CD147分子高表達(dá)于HCC等多種惡性腫瘤，是CD147分子超家族中的一員。研究顯示在2D細(xì)胞培養(yǎng)條件下，HAb18G/CD147分子在HCC黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移方面起到重要的作用。
　　本課題的研究目的是：（1）建立HCC的3D細(xì)胞培養(yǎng)模型；（2）運(yùn)用HCC的3D細(xì)胞培養(yǎng)模型研究細(xì)胞外微環(huán)境在肝癌細(xì)胞以及間質(zhì)細(xì)胞表型形成中的作用；（

4、3）運(yùn)用HCC的3D細(xì)胞培養(yǎng)模型研究HAb18G/CD147分子在調(diào)節(jié)MMPs分泌活化和黏附因子表達(dá)中的作用，進(jìn)而深入研究HAb18G/CD147分子在HCC黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移方面的分子機(jī)制。
　　本課題共分三個(gè)部分：（1）運(yùn)用細(xì)胞外基質(zhì)Matrigel膠建立HCC的3D細(xì)胞培養(yǎng)模型；（2）在3D細(xì)胞單培養(yǎng)條件下觀察HCC細(xì)胞骨架分布、HAb18G/CD147分子表達(dá)、MMPs合成活化以及一些關(guān)鍵黏附蛋白表達(dá)的改變；（3）應(yīng)用HCC

5、細(xì)胞和成纖維細(xì)胞3D共培養(yǎng)模型深入研究HAb18G/CD147分子在腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的MMPs合成活化以及關(guān)鍵黏附蛋白表達(dá)中的作用。
　　我們采用融化的Matrigel膠重懸細(xì)胞的方法成功建立了HCC的3D細(xì)胞培養(yǎng)模型。在HCC細(xì)胞3D單培養(yǎng)條件下，細(xì)胞外基質(zhì)在HCC細(xì)胞的表型形成中起到了重要的決定作用，該培養(yǎng)條件可以促進(jìn)人SMMC-7721肝癌細(xì)胞中HAb18G/CD147分子高表達(dá)進(jìn)而上調(diào)MMPs（MMP2和MMP9）分泌活

6、化，同時(shí)HAb18G/CD147的過表達(dá)伴隨E-cadherin、paxillin、FAK和p-FAK的表達(dá)上調(diào)以及F-actin的重排。在HCC細(xì)胞和成纖維細(xì)胞3D共培養(yǎng)條件下，人FHCC-98肝癌細(xì)胞和NHDF細(xì)胞中過表達(dá)的HAb18G/CD147分子可以提高這兩種細(xì)胞的MMPs（MMP2和MMP9）的分泌和活化水平，同時(shí)還可以激活這兩種細(xì)胞內(nèi)integrin下游信號(hào)通路，最終決定間質(zhì)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的表型，進(jìn)而增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞黏附、侵