體外侵襲實驗分離高侵襲性和低侵襲性腎癌細胞.pdf

1、腎細胞癌，是泌尿系統(tǒng)常見腫瘤，浸潤生長和遠處轉移是晚期腎癌的重要特征，近1/3的腎癌患者首診時已屬晚期，預后極差。腎透明細胞癌是腎細胞癌中最常見的病理類型，約占70％～80％[1]，因此篩選和鑒定腎透明細胞癌轉移相關基因，尋找一與轉移相關的生物學標志物，用于早期發(fā)現腎癌轉移，對降低腎癌死亡率具有重要意義。而建立具有相同遺傳背景的高、低轉移性細胞株是尋找和篩選轉移相關基因的基礎和關鍵。腫瘤轉移異質性理論認為，在腫瘤組織中存在著具有不同侵襲

2、、轉移能力的細胞亞群，而只有那些具有完成侵襲轉移全過程能力如粘附能力、蛋白水解能力、細胞游走能力的瘤細胞才能最終形成轉移灶。因此可依據某些侵襲、轉移有關因素的表達與否篩選出具有不同侵襲轉移能力的瘤細胞。 Matrigel膠是一種從EHS(Engelbreth-Holm-Swarm)小鼠肉瘤中提取的可溶性基底膜成分。主要由層粘連蛋白、IV型膠原蛋白、硫酸乙酞肝素糖蛋白(類肝素蛋白多糖)、纖維連接蛋白等組成。室溫下Matrigel膠

3、聚合成一種具有生物學活性的基質材料，在聚碳酸濾膜上形成一膠凍狀物，封閉聚碳酸濾膜上的小孔，作用與哺乳動物細胞基底膜類似，只有那些具有蛋白水解能力的腫瘤細胞才能穿過聚碳酸濾膜上的小孔，無蛋白水解能力的非侵襲性細胞不能穿過。因此Matrigel膠可用于體外分離不同侵襲性腫瘤細胞。本研究擬構建侵襲小室，用于體外分離高侵襲性和低侵襲性腎癌細胞。分別從高侵襲性腎癌細胞和低侵襲性腎癌細胞中提取總RNA，并利用SMART。技術將RNA轉化成cDNA，

4、為進一步抑制性消減雜交打下基礎?！　∧康模汉Y選相同背景來源的高侵襲性和低侵襲性腎細胞癌細胞，對比二者差異。提取高、低侵襲性腎癌細胞的總RNA，并轉化為cDNA，為研究腎細胞癌轉移相關基因打下基礎。 方法：對腎癌細胞株ACHN進行傳代培養(yǎng)。在預實驗確定鋪膠濃度、消化回收時間的基礎上，采用涂有Matrigel膠的Transwell對傳代培養(yǎng)的腎癌細胞進行體外侵襲實驗，分離回收高侵襲性和低侵襲性腎癌細胞。分別從高侵襲性腎癌細胞與低侵

5、襲性腎癌細胞中提取總RNA,并利用SMART技術將RNA轉化成cDNA。 結果：以濃度為1.17mg/ml、20μl/孔鋪膠在。Transwell，固定細胞懸液密度(5×106/ml)，第48小時消化回收細胞較為理想。非侵襲性細胞呈散在生長，侵襲性細胞多呈聚集樣生長，成功分離高侵襲性和低侵襲性腎癌細胞。從高侵襲性腎癌細胞與低侵襲性腎癌細胞提取的RNA經變性甲醛/瓊脂糖凝膠電泳分析表明完整性和純度良好，SMART。技術可以利用微量